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細(xì)胞培養(yǎng)不再難:貼壁細(xì)胞培養(yǎng)技巧全攻略!
細(xì)胞生長(zhǎng)特性分為兩種,一種是貼壁一種是懸浮,不同的細(xì)胞形態(tài)對(duì)應(yīng)的操作方法也大有不同,今天我們主要講解一下貼壁細(xì)胞的相關(guān)培養(yǎng)技巧。在操作貼壁細(xì)胞的過(guò)程中,消化環(huán)節(jié)確實(shí)至關(guān)重要。消化時(shí)間的長(zhǎng)短需要根據(jù)每個(gè)細(xì)胞的狀態(tài)進(jìn)行精確調(diào)整,以確保細(xì)胞的健康和完整性。消化過(guò)度或消化不充分都可能對(duì)細(xì)胞造成不可逆的影響,因此,了解并準(zhǔn)確判斷貼壁細(xì)胞的狀態(tài)對(duì)于確定消化時(shí)間至關(guān)重要。貼壁細(xì)胞狀態(tài),分為以下幾種:1,疏松貼壁細(xì)胞細(xì)胞傳代密度控制在80%左右最少不能低于60%,消化時(shí)間控制在1-2分鐘左右,傳代后48小時(shí)內(nèi)不 -
1976年發(fā)現(xiàn)的IL-2,在整個(gè)免疫治療,有著不可替代的位置。Rosenberg稱(chēng)之為第一個(gè)人類(lèi)腫瘤有效的免疫治療方法。一,IL-2/IL-2R受體里程碑研究1976年NCI腫瘤細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的RobertGallo,使用PHA刺激淋巴細(xì)胞產(chǎn)生條件培養(yǎng)基培養(yǎng)骨髓細(xì)胞,其中90%的T細(xì)胞長(zhǎng)達(dá)9個(gè)月的生存維持。在此之前,原代T細(xì)胞無(wú)法體外培養(yǎng),是免疫學(xué)發(fā)展的巨大瓶頸性技術(shù)問(wèn)題。這個(gè)未被純化的成分稱(chēng)之為T(mén)細(xì)胞生長(zhǎng)因子(TCGF)。條件培養(yǎng)基培養(yǎng)骨髓細(xì)胞(文獻(xiàn)1)1980年NCI腫瘤細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的
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TrypLE殘留怎么辦?定量檢測(cè)強(qiáng)勢(shì)來(lái)襲,助力生物藥品質(zhì)控
在疫苗、基因以及細(xì)胞治療相關(guān)藥物的生產(chǎn)過(guò)程中,常涉及貼壁細(xì)胞培養(yǎng),在其傳代消化過(guò)程中則需要使用胰蛋白酶進(jìn)行消化,而目前越來(lái)越多的客戶(hù)更傾向于使用重組胰蛋白酶類(lèi)似物(GibcoTrypLE和逐典TrypLUS)對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行消化,與重組胰蛋白酶相比,其更溫和,對(duì)細(xì)胞傷害更小。近年來(lái)關(guān)于生物制品生產(chǎn)的相關(guān)法規(guī)中已經(jīng)明確了細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)添加物檢測(cè)的必要性,故TrypLE的殘留量檢測(cè)也愈發(fā)引起重視。逐典生物自主研發(fā)的TrypLE定量檢測(cè)試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù),可以快速、準(zhǔn)確地識(shí)別包 -
瑞孚迪explorer G3自動(dòng)化整合系統(tǒng)助力類(lèi)器官工程流水線(xiàn)制備
2023年底,澳大利亞昆士蘭大學(xué)AIBN中心的科學(xué)家們成功找到一種能夠逆轉(zhuǎn)(SARS-COV-2)感染所引發(fā)的大腦過(guò)早衰老的策略,為病毒感染后神經(jīng)健康問(wèn)題的治療帶來(lái)曙光。研究團(tuán)隊(duì)運(yùn)用合成腦類(lèi)器官模型,深入探討了SARS-COV-2變體對(duì)腦組織的損傷機(jī)制。研究人員指出,感染會(huì)加速衰老細(xì)胞的生成,這些細(xì)胞隨著年齡增長(zhǎng)在大腦中逐漸累積。而這些衰老細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致炎癥及組織退化,進(jìn)而引發(fā)患者出現(xiàn)腦霧、記憶喪失等認(rèn)知障礙。研究團(tuán)隊(duì)利用大腦類(lèi)器官模型進(jìn)行藥物篩選,發(fā)現(xiàn)了四種藥物可以選擇性地消除由引起的這些衰老細(xì)胞 -
Simoa | 測(cè)定表征和驗(yàn)證方法:第1部分——檢測(cè)極限和定量下限
Quanterix技術(shù)應(yīng)用科學(xué)家JohnMurray介紹這篇博客文章的目的是為Simoa®用戶(hù)提供有效的資源,用于檢測(cè)下限(LOD)和定量下限(LLOQ)的常見(jiàn)分析驗(yàn)證。確定檢測(cè)和定量下限的方法在復(fù)雜性上有所不同,這取決于測(cè)定開(kāi)發(fā)階段和適用的法規(guī)。例如,在早期開(kāi)發(fā)中,通過(guò)簡(jiǎn)單地插值校準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)近似LOD可能就足夠了,但對(duì)于最終驗(yàn)證,可能需要使用真實(shí)樣本進(jìn)行更深入的實(shí)驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)方法。指導(dǎo)方針臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所(ClinicalandLaboratoryStandardsInstituteCLSI) -
國(guó)內(nèi)外圍繞IL-15的開(kāi)發(fā)的新藥品種主要包括重組細(xì)胞因子、基因工程細(xì)胞療法、細(xì)胞因子溶瘤病毒、IL-15超激活復(fù)合物、靶向IL-15的蛋白質(zhì)等。1,重組細(xì)胞因子rhIL-15(北京凱因,全球I期)KW-007,一種注射用重組人白細(xì)胞介素15(rhIL-15),主要適應(yīng)癥為晚期實(shí)體瘤等。目前共開(kāi)展6項(xiàng)I期臨床試驗(yàn),已完成5項(xiàng),其中,2019年rhIL-15在晚期實(shí)體瘤患者中Ia期臨床試驗(yàn)正在開(kāi)展。PEG-rhIL-15(NektarTherapeutics|PfizerInc.|Merck全球臨床
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輕松上手:細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞消化全攻略
細(xì)胞是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要材料,也是生物細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。藥物、基因功能、疾病機(jī)理等的相關(guān)研究多數(shù)需要在細(xì)胞水平進(jìn)行闡釋。在細(xì)胞培養(yǎng)和消化的操作過(guò)程中,受人員操作和環(huán)境條件的影響比較大,因此每個(gè)環(huán)節(jié)都有可能導(dǎo)致操作的失敗。以下是我們匯總了關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞消化的小貼士,希望能給正操作細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞消化的研發(fā)人員帶來(lái)幫助細(xì)胞系身份需明確之所以選定某種細(xì)胞系開(kāi)展實(shí)驗(yàn),是因?yàn)樗x細(xì)胞系的一些特性符合研究方向的設(shè)定。比如組織特性,疾病特性,功能特性,基因表達(dá)特性等。一旦用錯(cuò)了細(xì)胞株,對(duì)研究結(jié)果的判斷就會(huì)帶來(lái) -
Q1:在使用溫度低于最適溫度37℃時(shí),如何保證全能核酸酶的應(yīng)用效果?由于逐典全能核酸酶在0-45°C溫度范圍下都具有活力,全能核酸酶對(duì)核酸的消化效果取決于酶的添加量、消化溫度和反應(yīng)時(shí)間,當(dāng)反應(yīng)溫度較低時(shí),可以適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間;不能依賴(lài)增加全能核酸酶添加量保證消化效果,避免添加量過(guò)大導(dǎo)致全能核酸酶殘留的問(wèn)題。Q2:消化體系中的什么物質(zhì)會(huì)影響全能核酸酶的酶活和消化效果?消化體系中若含有高濃度的鈉鹽、鉀鹽,超過(guò)200mM時(shí)會(huì)受到明顯抑制,其余高于100mM磷酸鹽,100mM硫酸銨等均會(huì)抑制酶活。特別是