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近幾年,分子診斷快速興起,促進了國內檢驗技術的發展。目前該技術已廣泛應用于疾病檢測、基因檢測、病毒和病原菌檢測、食品安全檢測、遺傳檢測、動物檢測,環境檢測等各個領域。
傳統分子診斷試劑存在運輸和保存的難題。為確保試劑內有效成分(DNA酶、反轉錄酶等)的生物活性,一般需要在-20℃左右的冷鏈環境中儲運。冷鏈運輸的需要大量的冰袋或干冰,成本較高,而且環境溫度的變化容易造成檢測試劑反復凍融,會直接影響試劑的性能和保質期。
那么,是否有更方便安全的
存儲和運輸的方式呢?
經深入研究,發現將液體試劑
凍干成固體試劑將能很好解決上述問題
可常溫運輸和儲存,更長的保質期
隨來隨測,不同品種同時上機,不同品類同時檢測
提高效率,控制成本:常溫、長期穩定;快速配送、便捷使用
絕大部分的溶液都可以開發成凍干劑型,但是存在一定的風險,原料及保護劑、凍干工藝、凍干設備性能深度跨越、相互干擾,這種領域交叉相互干擾會導致研發周期失控。由此可見,凍干絕不是簡單的工藝,每一步都需要慎重選擇。
原料廠家的酶和體系,凍干難度有差異,更加重要的是,能否提供足夠的技術支持
在開發過程需判斷:體系干擾、輔料及保護劑影響、工藝和環境干擾
翌圣生物提供優質可凍干原料
——讓核酸檢測更加高效、便捷、經濟
凍干原料的篩選不是單純去掉不可凍干物質,原料選擇環節需要針對每一個組份進行篩選或調試。切忌盲目尋找可凍干原料;不同原料,凍干工藝及凍干體系都需要相應調整。
翌圣生物在此技術上不斷加大投入,力求推出優質可凍干原料,幫助客戶從原料上解決凍干難題。
圖. qPCR反應體系的組成示意圖
可凍干酶選擇誤區
液體體系中篩選出性能*的無甘油酶,用于凍干一定沒有問題
把已有體系中不可凍干的成分去掉就是可凍干體系了
凍干過程能夠將不可凍干的體系變為可凍干體系
可凍干酶篩選需注意
液體體系中篩選出的性能*的酶,不一定凍干后性能還是*,需要多幾款候選酶
酶的氨基酸序列和修飾差異,會影響酶的空間結構穩定性和凍干耐受性
酶的儲液直接影響酶的穩定性,可凍干酶需要優化儲液以保證酶儲存穩定
甘油酶去除甘油之后,穩定性、酶活都可能發生極大變化,對應體系需要重調
Buffer中不可含有可揮發和易氧化成分
需對鹽離子濃度進行調試-過高可能造成凍干形態差;過低可能影響擴增性能
凍干可能造成pH值變化,影響擴增性能
高乘數的試劑利于凍干
凍干原料體系中的保護劑含量需明確
凍干對酶有一定損傷,補酶量需調試
一種無甘油、即用型的分子診斷試劑,含有耐熱逆轉錄酶、熱啟動Taq DNA聚合酶、反應緩沖液、dNTPs、氯化鎂以及凍干保護劑,同時添加了有效抑制非特異性PCR擴增的因子和提升多重qPCR反應擴增效率的因子。該產品是開發常溫穩定、可室溫運輸儲存、多重RT-qPCR的理想選擇。
來源:翌圣生物
凍干后依然保持酶活性完整,性能和液體試劑一樣
凍干后室溫下保存依然穩定,不需要冷鏈運輸和低溫儲存
降低成本和操作復雜性:提供參考凍干工藝,助力凍干流程;不需要額外添加凍干保護劑,可直接用于凍干
部分數據展示
儀器 | 7500 | 體系 | 25 μL |
模板 | 假病毒 | 模板濃度 | 105、104、103 copies/mL |
程序 | 50°C 10 min;95°C 5 min;45 cycles (95°C 15sec;60°C 15sec) |
圖. 13775液體性能:對假病毒模板分別使用高靈敏度版RT-qPCR試劑13110(紅色)和13775(藍色)試劑進行多重RT-qPCR擴增,左為FAM通道,右為VIC通道。
圖. 13775液體試劑熱穩定性37℃ 5 Days:將13775液體試劑置于37℃(綠色)和-20℃(藍色)條件下5天,進行多重RT-qPCR擴增測試,左為FAM通道,右為VIC通道。
圖. 13775產品凍干后性能:對假病毒模板分別使用液體試劑(紅色)和13775凍干粉(紫紅色)進行多重RT-qPCR擴增,左為FAM通道,右為VIC通道。結果表明,凍干后13775試劑活性完好,且依然具有高效多重反應能力。
圖. 13775凍干粉熱穩定性—37℃ 21 Days:將13775凍干粉置于37℃(綠色)和-20℃(藍色)條件下21天,進行多重RT-qPCR擴增測試,左為FAM通道,右為VIC通道。結果表明,凍干粉在37℃放置21天后,仍有良好的擴增效果。