生物制品中快速精準檢測支原體污染的方法
在生物制品制備過程中需要嚴格的質檢方能實現產品的安全可靠，如基因治療產品、細胞治療產品、生物疫苗等，這些生物制品大多以細胞為載體制備或構建，在生產制備過程易受到支原體污染。
據文獻報道，支原體污染在儲存細胞系中發生率約為 15%-35%，在生物制藥行業中約為0.44%-6.70%。在這些污染事件中，95%的支原體種類是以下幾種：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發酵支原體、人型支原體或萊氏無膽原體等[1]。支原體污染對于生物制備企業來講就如同夢魘一般，不僅導致產品品質下降；還會降低表達水平并最終導致產量降低，如污染了精氨酸支原體的抗體生產所用CHO DG44反應器中，發現在污染2-6天后開始產生副作用，使得細胞生長速率降低并導致反應體系內DO和pH改變。同時支原體污染也會對患者產生不良的副作用。快速、精確的檢測支原體的存在已然迫在眉睫，目前國內外藥典推薦的支原體檢測方法主要是基于培養法、NAT(核酸擴增)法、指示細胞培養法[2]。方法類型 | 優點 | 缺點 |
培養法 | 高靈敏度，可檢測到0.1CFU/mL | 時間過長，整個過程需28天 不同支原體需不同培養基進行培養，某些支原體難以培養 |
NAT法（核酸擴增） | 快速 達到10CFU/mL以下的檢測限 | 需要特定提取試劑盒和檢測設備 DNA的提取質量和效率影響結果的可信任度 需要其他方法如培養法進行可比驗證 |
指示細胞培養法 | 成本低 操作較為簡單 | 培養時間達一周左右 靈敏度低于培養法 存在假陽性和假陰性現象 |
翌圣生物經過匠心研發，基于EP藥典推薦NAT法推出超簡便快捷的qPCR支原體檢測試劑盒，克服了普通PCR靈敏度低和培養法耗時久的問題，將結果精準度和使用便捷度有了質的提升！翌圣生物支原體qPCR檢測試劑盒可用于確定如細胞種子庫、病毒培養和收獲、臨床治療用途的細胞和生物制品中支原體污染過程和放行精確檢測使用，3h內可快速、簡便檢測支原體存無，優于培養法的28天耗時檢測過程。高靈敏度：支原體標準品驗證靈敏度達10CFU/mL
符合法規：檢測方法和過程按照藥典要求驗證，符合法規要求
適用性廣：檢測105種支原體，適用多種樣品（細胞、病毒、培養基、細胞制品等）
準確性高：探針法檢測，避免染料法造成的假陽性問題，批次間穩定
靈敏度和擴增效率測試
試劑盒擴增效率：101-108 copies/uL
A:培養細胞3天及以上取樣品，提取DNA后，取20 μL 待測樣本按說明書給定的操作程序進行，待qPCR反應結束后通過FAM和VIC通道信號的Ct值來判斷樣品是否受到支原體污染，如果FAM通道信號Ct<40，且有明顯的擴增曲線，VIC通道信號Ct<40，且有明顯的擴增曲線，說明樣品有支原體污染。
產品名稱
| 產品編號 | 規格 |
MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit
支原體qPCR檢測試劑盒（探針法）
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40618ES25
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25 T
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40618ES60
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100 T
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類別 | 產品 | 貨號 | 規格 |
支原體檢測 | GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒 | 40601ES10/20 | 10/20 assays |
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MycAwayTM Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒 | 40612ES25/60 | 25/100 T |
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支原體去除 | MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAwayTM 支原體去除試劑（1000×） | 40607ES03/08 | 1/5×1 mL |
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支原體預防 | MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAwayTM 支原體預防試劑（2000×） | 40608ES03/08 | 1/5×1 mL |
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[1] Fratz-Berilla EJ, Angart P, Graham RJ, et al. Impacts on product quality attributes of monoclonal antibodies produced in CHO cell bioreactor cultures during intentional mycoplasma coNATmination events. Biotechnol Bioeng. 2020;117(9):2802-2815.[2] Volokhov DV, Graham LJ, Brorson KA, Chizhikov VE. Mycoplasma testing of cell substrates and biologics: Review of alternative non-microbiological techniques. Mol Cell Probes. 2011 Apr-Jun;25(2-3):69-77.[3] Ingebritson AL, Gibbs CP, Tong C, Srinivas GB. A PCR detection method for testing Mycoplasma coNATmination of veterinary vaccines and biological products. Lett Appl Microbiol. 2015 Feb;60(2):174-180.
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