在細胞代謝研究與臨床診斷領域,乳酸檢測扮演著關鍵角色。精準把握乳酸檢測工作原理,有助于科研人員與醫(yī)務工作者更好地運用相關技術。
乳酸檢測始于樣本采集。血液、組織勻漿、培養(yǎng)上清等常見樣本,各有其采集規(guī)范。以血液為例,需采用專用采血管,避免細胞代謝持續(xù)改變?nèi)樗釢舛取2杉螅瑯颖拘杓皶r離心,分離出血清或血漿,此過程溫度控制至關重要,低溫環(huán)境可抑制細胞殘余活性,防止乳酸濃度在檢測前發(fā)生偏移。對于組織樣本,精確稱重后加入相應比例的預冷生理鹽水或磷酸鹽緩沖液,使用勻漿器充分研磨,制備成均勻懸液,隨后離心取上清,確保后續(xù)檢測體系均一性。
乳酸檢測試劑盒核心在于構建精準反應體系。體系中,乳酸氧化酶是關鍵酶。當樣本中乳酸與乳酸氧化酶接觸,氧化反應瞬間啟動。乳酸作為底物,被氧化生成丙酮酸,此過程伴隨電子轉移,產(chǎn)生過氧化氫。這看似簡單反應,實則對反應條件極為敏感。體系 pH 值需嚴格調(diào)控在 7.0 - 7.4 之間,偏離此范圍,乳酸氧化酶活性將呈拋物線式下降。溫度亦然,37℃是多數(shù)試劑盒設定的黃金溫區(qū),溫度波動 ±2℃,酶促反應速率會偏離標準曲線 ±15%,直接干擾檢測結果準確性。
生成的過氧化氫需轉化為可被儀器捕捉的信號。基于色原底物顯色法是經(jīng)典途徑。過氧化氫在過氧化物酶催化下,將無色色原底物氧化為有色產(chǎn)物。此有色物質(zhì)光吸收特性是定量關鍵。分光光度計登場,特定位點波長(多為 500 - 550nm)下,光束穿透反應溶液,部分光被有色分子吸收。儀器精準測量吸光度值,依據(jù)朗伯 - 比爾定律,吸光度與乳酸初始濃度呈線性關系,線性范圍 typically 在 0.1 - 10mmol/L,超出此區(qū)間,反應體系可能因底物過量或酶飽和,導致結果失真。
然而,生物樣本復雜性使檢測面臨干擾。內(nèi)源性抗壞血酸、尿酸,外源性藥物酚類成分,均能模擬過氧化氫效應,造成吸光度虛高。優(yōu)秀試劑盒會添加特異性干擾抑制劑,如抗壞血酸氧化酶可特異性清除抗壞血酸,猶如為反應體系安裝精準 “過濾網(wǎng)"。同時,反應體系離子強度調(diào)節(jié)劑發(fā)揮作用,維持離子平衡,避免鈣、鎂離子與試劑成分形成絡合物,沉淀于反應容器壁,干擾光信號傳輸。
為確保每批次檢測可靠性,質(zhì)控品全程陪伴。低、中、高三個濃度質(zhì)控品,分別代表臨床常見樣本濃度區(qū)間。檢測流程中,質(zhì)控品與樣本同步經(jīng)歷反應體系構建、信號轉換捕捉。其結果猶如檢測系統(tǒng)的 “健康報告",若低濃度質(zhì)控品偏差超 ±10%,提示試劑敏感性下滑;高濃度偏差超 ±8%,暗示酶活性或抗體結合力衰減,此時檢測數(shù)據(jù)需謹慎評估,及時追溯問題源頭,是儀器光路漂移,還是試劑儲存不當,都需排查。
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