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紅外分光光度計中使用的方法是一種稱為紅外光譜（IR）的分析方法。當物質(zhì)受到紅外線（2500-25000nm）照射時，基于分子振動和旋轉(zhuǎn)而發(fā)生吸收。
此時，分子內(nèi)連接原子的鍵部分根據(jù)鍵的類型而不同地膨脹和收縮，因此，吸收光譜也根據(jù)鍵的類型而不同。這就是紅外適合測定官能團結(jié)構(gòu)的原因。官能團的類型可以通過檢查吸收的紅外線的波數(shù)來確定。
檢測器測量因被樣品吸收（或反射）而減少的紅外輻射量。得到的IR光譜(紅外線吸收光譜)的橫軸為照射的紅外線的波數(shù)(單位記述：cm -1、讀數(shù)：Kaiser)，縱軸為透過率％T。
