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當前位置：北京百泰派克生物科技有限公司>>檢測技術服務>>蛋白分析>> 一文看懂 iTRAQ、SILAC 和無標
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在dànbáizhì組學研究中，dànbáizhì定量是理解生物系統動態變化的核心手段。隨著質譜技術的發展，iTRAQ、SILAC 和無biāojìdìng量（Label-Free Quantification, LFQ）成為主流的三種定量策略。它們各具特點，適用于不同實驗需求。
一、iTRAQ：異位標記，實現高通量多樣本比較
1、原理概述
iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）是基于同位素標簽的相對定量技術。實驗流程中，dànbáizhì樣本經yídànbáiméi消化成肽段后，用含有等質量的同位素標簽試劑（通常為4-plex、6-plex或8-plex）進行化學標記。標記后的樣本混合一起進行質譜分析，依據MS/MS級別釋放的報告離子強度進行定量比較。
2、優勢分析
多樣本并行分析：一次實驗可比較4至8個樣本，節省儀器時間，減少批次效應。
高通量和高覆蓋率：特別適用于大規模生物學重復實驗或多時間點研究。
適配性強：可用于細胞、組織甚至復雜生物體樣本。
3、局限性提示
定量精度受限于混合策略：樣本混合比例若偏差，將直接影響定量結果。
低豐度蛋白信號易受抑制效應干擾（Ratio Compression）：導致真實變化被低估。
成本較高：iTRAQ試劑價格昂貴，對預算有限的項目存在一定壓力。
二、SILAC：代謝標記，確保高準確度定量
1、原理概述
SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）采用穩定同位素標記必需氨基酸（如 ^13C6-賴氨酸、^13C6-jīngānsuān），通過細胞培養過程中自然代謝引入。輕重標簽樣本在培養階段即被標記，收獲后等量混合，共同進行蛋白提取、消化和質譜檢測。
2、優勢分析
定量準確性jígāo：標記發生在細胞生長過程中，避免了后期樣本處理差異。
簡化下游操作流程：標記后即可直接混合，減少批間偏差。
動態研究理想選擇：如細胞應激反應、藥物處理、時間序列實驗。
3、局限性提示
局限于細胞系統：無法直接應用于原代組織、血漿等復雜樣本。
培養條件要求嚴格：需要無標記氨基酸培養基，并確保細胞充分置換標記氨基酸。
標記成本和時間成本：對大規模細胞培養實驗提出較高要求。
三、無biāojìdìng量（LFQ）：靈活且經濟的定量選擇
1、原理概述
無biāojìdìng量基于肽段離子峰面積或峰強度的直接比較，不需要任何同位素標記。通常結合高重復性的數據依賴采集（DDA）或數據獨立采集（DIA）策略，通過jīngzhǔn的對齊和歸一化算法，實現不同樣本間蛋白豐度的相對定量。
2、優勢分析
無需化學或代謝標記：適用性極廣，可覆蓋所有類型的生物樣本。
經濟高效：特別適合預算有限或大樣本量的研究項目。
適配zuì新質譜平臺：如結合DIA策略，可極大提升數據完整性和重復性。
3、局限性提示
對質譜儀穩定性要求高：批次間小幅漂移也可能引發系統性偏差。
數據處理復雜：需要依賴先進的軟件算法進行峰提取、對齊和歸一化。
生物學重復數量需充足：以彌補單次采集中的潛在隨機誤差。
四、如何選擇適合的定量策略？
面對iTRAQ、SILAC和無biāojìdìng量這三種方案，選擇應基于實驗設計、樣本類型、預算和數據精度需求綜合考慮：
??如果樣本量大、需多條件比較，且預算充足，iTRAQ是非常理想的選擇。
??若關注動態過程、且樣本來源于可培養細胞，追求zuì高定量精度，可以選擇SILAC。
??當樣本異質性大或預算受xiànshí，且擁有高性能質譜平臺和成熟的數據處理能力，無biāojìdìng量則提供了靈活而經濟的方案。
不同方法之間并不存在juéduì的優劣之分，關鍵在于與研究目標的契合度。近年來，結合不同策略的混合定量方法也在快速發展，如SILAC-LFQ結合、TMT-DIA整合，為復雜生物學問題提供了更為細致的數據解析能力。
在dànbáizhì組學研究中，選擇zuì合適的定量策略，是確保實驗成功與數據可靠性的關鍵一步。無論是傾向于iTRAQ、SILAC還是無biāojìdìng量，理解各自技術特點和應用邊界，才能zuì大化發揮質譜平臺的潛能。作為科研伙伴，百泰派克生物科技始終致力于為廣大科研人員提供高質量、定制化的定量蛋白組分析服務，助力科學探索更進一步。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。
※服務優勢：
1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢：
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;
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百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢：
1.技術先進，填補技術空白
采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大，成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
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