Edman降解如何實現(xiàn)N端蛋白質(zhì)測序？步驟與機制解析檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

Edman降解如何實現(xiàn)N端dànbáizhì測序？Edman降解的核心原理是基于N端氨基酸的化學(xué)選擇性降解，通過環(huán)化裂解逐步去除dànbáizhìN端的氨基酸，并以穩(wěn)定的衍生物形式進行檢測。該方法基于化學(xué)反應(yīng)，利用異硫氰酸苯酯（PITC）特異性地與N端氨基酸結(jié)合，通過逐級切除并鑒定多肽鏈N端的氨基酸，實現(xiàn)N端dànbáizhì測序。Edman降解其核心步驟分為偶聯(lián)、裂解、轉(zhuǎn)化與檢測，循環(huán)重復(fù)直至目標序列解析完成。以下為詳細步驟及機制解析：

一、Edman降解的詳細實驗步驟

1、樣品準備

（1）dànbáizhì純化：確保蛋白樣品高純度，以減少背景噪聲。

（2）固定化處理：通常使用玻璃纖維膜或PVDF膜固定樣品，以提高降解穩(wěn)定性。

（3）檢查N端封閉情況：確保dànbáizhìN端沒有乙酰化、甲基化等修飾，否則Edman降解無法進行。

2、反應(yīng)流程

（1）PITC標記：在堿性緩沖液（如三乙胺）中加入PITC，使其與N端氨基結(jié)合。

（2）酸性裂解：用三fúyǐsuān（TFA）促進環(huán)化反應(yīng)，使PTH-氨基酸從肽鏈中斷裂。

（3）有機溶劑萃取：用有機溶劑萃取生成的PTH-氨基酸，以便進行檢測。

3、PTH-氨基酸鑒定

采用高效液相色譜（HPLC）進行分離分析。通過與標準PTH-氨基酸對照，確定具體的氨基酸種類。

4、重復(fù)循環(huán)

清洗反應(yīng)體系，去除殘余PTH-氨基酸。繼續(xù)降解下一個氨基酸，直至實現(xiàn)完整N端dànbáizhì測序。

二、Edman降解的機制解析

1、選擇性化學(xué)反應(yīng)

PITC能夠特異性地與N端氨基酸發(fā)生反應(yīng)，而不會影響dànbáizhì內(nèi)部的肽鍵。

2、溫和的降解條件

相比其他化學(xué)降解方法（如水解法），Edman降解的條件較溫和，避免了dànbáizhì或多肽的整體破壞。

3、高效的環(huán)化裂解

通過酸性環(huán)境誘導(dǎo)環(huán)化反應(yīng)，使N端氨基酸高效釋放，同時肽鏈的其余部分保持完整。

4、穩(wěn)定的PTH-氨基酸分析

PTH-氨基酸具有穩(wěn)定的光學(xué)特性，能夠通過HPLC等方法準確檢測。

三、Edman降解的優(yōu)點與局限

1、優(yōu)點：

（1）高專一性識別N端序列，無需數(shù)據(jù)庫比對

（2）可用于確認蛋白翻譯起始位點或標簽序列

（3）對于小肽、合成肽、修飾蛋白等提供準確N端結(jié)構(gòu)驗證

2、局限：

（1）需高純度、均一性蛋白樣品（雜質(zhì)影響明顯）

（2）無法解析有N端阻斷（如乙酰化、修飾）的蛋白

（3）序列過長或樣品復(fù)雜度高時通量低

（4）對翻譯后修飾識別能力有限

Edman降解通過化學(xué)反應(yīng)的jīngzhǔn級聯(lián)，實現(xiàn)了N端氨基酸的逐級解析。盡管面臨通量低、長度受限等挑戰(zhàn)，其在短肽測序、N端修飾檢測及法規(guī)質(zhì)控中的bùkětìdài性，使其在現(xiàn)代dànbáizhì科學(xué)中仍占有一席之地。未來，與質(zhì)譜、微流控及人工智能的深度融合，或?qū)檫@一經(jīng)典技術(shù)注入新的活力。百泰派克生物科技7大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式基于Edman降解的蛋白N端序列分析服務(wù)需求，致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)！

Edman降解 vs 質(zhì)譜：誰更適合你？

百泰派克生物科技配備自動化Edman降解儀與高靈敏HPLC系統(tǒng)，結(jié)合質(zhì)譜測序數(shù)據(jù)，為客戶提供N端結(jié)構(gòu)驗證 + 全長dànbáizhì測序的整合解決方案，適配科研藥物研發(fā)需求。如果您正面臨蛋白N端結(jié)構(gòu)驗證或標簽表達困擾，歡迎聯(lián)系百泰派克生物科技，獲取zhuānyè、快速、定制化的測序服務(wù)支持！

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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