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14次【JD-ZJY1】山東競道廠家攜手共創(chuàng),讓每一刻都閃耀企業(yè)光輝!
靈敏度驗(yàn)證
樣本準(zhǔn)備
梯度稀釋樣本:選取已知含有轉(zhuǎn)基因成分的油菜陽性樣本,提取其核酸。然后對該核酸進(jìn)行梯度稀釋,例如設(shè)置 10 倍、100 倍、1000 倍等多個(gè)稀釋梯度。以轉(zhuǎn)基因油菜中常見的外源基因(如抗除草劑基因)為檢測目標(biāo),通過核酸定量儀確定初始核酸濃度后進(jìn)行稀釋。
陰性樣本對照:準(zhǔn)備一定數(shù)量的非轉(zhuǎn)基因油菜陰性樣本,同樣提取核酸,作為陰性對照,用于排除假陽性結(jié)果對靈敏度驗(yàn)證的干擾。
檢測過程
使用廠家檢測產(chǎn)品:按照廠家提供的操作手冊,使用其轉(zhuǎn)基因油菜檢測試劑盒和配套儀器對梯度稀釋樣本和陰性對照樣本進(jìn)行檢測。每個(gè)稀釋梯度樣本和陰性對照樣本都設(shè)置多個(gè)重復(fù),一般不少于 3 次重復(fù),以保證結(jié)果的可靠性。
記錄檢測結(jié)果:詳細(xì)記錄每個(gè)樣本的檢測結(jié)果,包括是否出現(xiàn)陽性信號、信號強(qiáng)度等信息。
結(jié)果分析
確定檢測下限:以能夠穩(wěn)定檢測出陽性信號的核酸濃度作為該檢測廠家的靈敏度指標(biāo)。例如,在某個(gè)稀釋梯度下,所有重復(fù)樣本均能檢測出陽性信號,而下一個(gè)更高稀釋梯度(核酸濃度更低)的樣本中部分或全部重復(fù)樣本無法檢測出陽性信號,那么該稀釋梯度對應(yīng)的核酸濃度即為檢測下限,也就是靈敏度的體現(xiàn)。
特異性驗(yàn)證
樣本收集
多種樣本類型:收集多種類型的樣本,包括轉(zhuǎn)基因油菜陽性樣本、非轉(zhuǎn)基因油菜陰性樣本,以及其他可能存在交叉反應(yīng)的植物樣本,如其他轉(zhuǎn)基因作物(轉(zhuǎn)基因大豆、轉(zhuǎn)基因玉米等)和非轉(zhuǎn)基因近緣植物樣本。
樣本處理:對所有樣本進(jìn)行核酸提取,確保提取的核酸質(zhì)量和濃度符合檢測要求。
檢測過程
統(tǒng)一檢測條件:使用廠家的轉(zhuǎn)基因油菜檢測試劑盒和儀器,在相同的檢測條件下對所有樣本進(jìn)行檢測。嚴(yán)格按照操作手冊進(jìn)行操作,避免因操作差異導(dǎo)致結(jié)果偏差。
觀察交叉反應(yīng):觀察檢測結(jié)果,判斷是否存在交叉反應(yīng)。如果非轉(zhuǎn)基因油菜陰性樣本和其他非目標(biāo)植物樣本均未出現(xiàn)陽性信號,而轉(zhuǎn)基因油菜陽性樣本出現(xiàn)陽性信號,說明該檢測產(chǎn)品具有較好的特異性;如果非目標(biāo)樣本出現(xiàn)了陽性信號,則表明存在交叉反應(yīng),特異性較差。
結(jié)果分析
特異性評估:根據(jù)檢測結(jié)果計(jì)算特異性指標(biāo),特異性 = (真陰性樣本數(shù))/(真陰性樣本數(shù) + 假陽性樣本數(shù))× 100%。真陰性樣本數(shù)是指非轉(zhuǎn)基因油菜陰性樣本和其他非目標(biāo)植物樣本中檢測結(jié)果為陰性的數(shù)量,假陽性樣本數(shù)是指這些樣本中檢測結(jié)果為陽性的數(shù)量。特異性越高,說明檢測產(chǎn)品越能準(zhǔn)確區(qū)分轉(zhuǎn)基因油菜和非轉(zhuǎn)基因油菜及其他非目標(biāo)植物。
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