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干貨 | 病毒滴度檢測,除了空斑試驗還有更好的選擇

2023-9-12  閱讀(233)

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什么是病毒滴度呢?就像重組蛋白合成以后需要檢測純度一樣,病毒包裝后的效力如何,如何定量,也是必須要檢測的,專業術語稱為:病毒滴度的測定。病毒滴度是指單位體積液體中具有生物活性的病毒顆粒數,是衡量病毒數量和毒力的一個重要指標。病毒滴度測定是指確定給定樣品中病毒顆粒的濃度的過程。它是評估病毒產品,如疫苗、基因治療載體或診斷試劑的質量和效力的一個重要參數。


 

 

病毒滴度檢測方法比較
 
病毒滴度的測定方法有多種,主要分為物理方法和生物方法兩大類。物理方法是通過測定病毒顆粒的大小、形態、數量、電荷、光學性質等,來推算病毒滴度,如電子顯微鏡法、光散射法、熒光標記法等。生物方法是通過測定病毒對宿主細胞或動物的感染能力或致死能力,來推算病毒滴度,如空斑形成單位法、組織培養感染劑量法、半數致死劑量法等。不同的方法有不同的優缺點和適用范圍,需要根據實驗目的和條件選擇合適的方法。

 

 

 

qPCR法在病毒滴度檢測中的應用
 

常用的檢測方法為使用特異性抗體,通過熒光灶試驗(FFA)、空斑試驗或細胞培養半數感染量(CCID50)等來實現,但是這些方法均涉及特異性抗體制備困難、操作復雜且要求高、耗時長、主觀性大、通量小等不足,不利于多價疫苗產品的精準配制和生產全過程的質量控制。空斑試驗被認為是測定病毒感染性的金標準,但它耗時、勞力密集,且需要每種病毒的適宜細胞系和空斑形成。


相比之下,qPCR是一種簡單的、高通量的測定純化病毒樣本中病毒顆粒數的方法。基于核酸的定量檢測方法具有試劑材料可及性強、可操作性強、一致性高、耗時短、通量大、結果更加客觀等優點,已經成功應用于甲型肝炎、腮腺炎病毒疫苗、AAV基因治療藥物等。


如MSD RotaTeq(口服輪狀病毒疫苗)使用的就是基于細胞感染的核酸定量檢測方法(qPCR法),但由于疫苗毒株不同,基因序列不同,細胞感染特點也不同,該方法需要針對不同疫苗毒株進行不同設計。


AAV(腺相關病毒)基因治療藥物因其“一次給藥,終身治愈"的特點,發展勢頭的強勁自不必多說,因此AAV藥物的質量控制(鑒別,純度,含量與效價)至關重要。由于其生物學滴度的測定仍很繁瑣,不同實驗室使用各自的方法和參照,這些都會影響rAAV在臨床上的應用,因此qPCR法因其優勢在AAV檢測中應用更為廣泛。

 

 

qPCR法檢測原料分享
 
翌圣生物作為生命科學工具供應商,長期為IVD企業提供高品質、高性價比的原料,目前已開發出各類探針法的qPCR/RT-qPCR檢測通用原料,已被下游廠家應用于基因治療和腫瘤治療等多個領域中各種病毒載體藥物或疫苗的鑒別和效力評價。

 

 

產品指南
 



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