欧美日韩成人在线,337P粉嫩日本亚洲大胆艺术,色综合久久久无码中文字幕波多,麻豆人妻少妇精品无码专区

翌圣生物科技(上海)股份有限公司

初級會員·13年

聯系電話

400-6111-883

您現在的位置: 首頁> 技術文章 > 翌圣ZymeEditor平臺RPA核心酶原料助力恒溫擴增技術升級!
初級會員·13年
人:
曹女士
話:
400-6111-883
機:
后:
4006-111-883
真:
86-21-34615995
址:
上海市浦東新區天雄路166弄1號3樓
址:
www.yeasen.com

掃一掃訪問手機商鋪

翌圣ZymeEditor平臺RPA核心酶原料助力恒溫擴增技術升級!

2023-7-18  閱讀(298)

分享:

重組酶聚合酶擴增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)是Piepenburg等人在2006年利用參與細胞DNA合成的蛋白重組和修復開發出的一種新的核酸恒溫擴增技術。該技術可以在37~42 ℃條件下實現待測靶標的快速檢測。它具有反應靈敏度高、特異性強、對儀器依賴程度低且可整合多種檢測模式等優點,特別適用于基層和現場即時檢測,可廣泛應用于體外診斷、獸醫、食品安全、生物安全、農業等領域[1]


 

一、RPA技術原理

RPA技術主要依賴于能結合寡核苷酸引物的T4噬菌體來源的重組酶T4 UvsX、單鏈結合蛋白gp32和鏈置換Bsu DNA 聚合酶以及兩條特異性的上下游引物實現擴增,具體擴增原理如圖1所示:

1.重組酶聚合酶擴增RPA技術擴增原理圖[2]

1.重組酶引物復合體的形成:重組酶T4 UvsX在ATP的參與和定位因子(T4 UvsY)的幫助下與擴增引物結合形成重組酶引物復合體,并在雙鏈DNA中尋找同源序列;

2.重組酶引物復合體定位至同源序列:重組酶引物復合體一旦定位到同源序列,則會插入雙鏈DNA形成D-環結構,啟動鏈置換反應,單鏈結合蛋白gp32會與解開的DNA鏈結合防止進一步被置換。

3.鏈置換擴增啟動:重組酶T4 UvsX從重組酶引物復合體中被水解,3'端引物暴露并與Bsu DNA聚合酶結合,DNA開始復制延伸,最終兩條母鏈分離,形成兩條新的互補雙鏈DNA。該反應在37-42℃下進行,可在30 min內實現目標序列1012倍的擴增。

 

二、RPA技術優勢
1. 檢測靈敏度高:可將痕量的核酸模板(低至單拷貝)擴增至可以檢出的水平,且通常無需進行核酸純化。
2. 無需昂貴的配套儀器設備:37~42°C恒溫反應,無須熱循環,擺脫儀器束縛,方便快捷。
3. 樣本耐受性高:適合復雜樣本的擴增檢測。例如未經核酸純化的血液或鼻拭子,只需要通過熱或堿進行預處理促進核酸釋放即可。
4. 檢測方法多樣化:包括電泳法檢測、熒光探針法檢測、側流層析試紙條檢測等。

 

三、RPA技術應用
RPA技術可用于不同種類的目標生物檢測,如細菌、真菌、病毒、原生動物等的雙鏈DNA、單鏈DNA、甲基化DNA以及通過RNA或miRNA反轉錄產生的cDNA等核酸樣本。RPA技術目前已被成功應用于農業、醫學、食品、疫病防控等領域,具有廣闊的應用前景。

 

圖2.RPA技術應用

 

四、RPA技術核心酶原料
翌圣ZymeEditor™酶改造平臺針對RPA技術,目前已獲得RPA全系列性能優良的產品,包括鏈置換Bsu DNA polymerase、T4 UvsX Recombinase、T4 UvsY protein、T4 gene 32 protein、肌酸激酶Creatine Kinase和Exonuclease III。

 

翌圣RPA產品選擇指南

 

產品名稱產品貨號產品作用
Bsu DNA polymerase (Large fragment, 5 U/μL)11078ES結合引物與原始靶核酸序列互補合成新的DNA模板
T4 UvsX Recombinase (2 μg/μL)11079ES具有配對和鏈轉移活性的重組酶
T4 UvsY protein (2 μg/μL)11080ES重組酶輔助因子,刺激T4 UvsX的單鏈DNA依賴性ATP酶活性并降低活性所需的T4 UvsX臨界濃度
T4 gene 32 protein (gp 32) T4噬菌體基因32編碼蛋白11081ES參與DNA復制、修復、重組與解鏈后的單鏈DNA結合,防止自雜交
Creatine Kinase (2 μg/μL) 肌酸激酶14502ES刺激ATP和肌酸分解為磷酸肌酸和ADP,釋放能量
Exonuclease III (100 U/μL)14525ES具有3’→5’外切酶活性,切斷熒光探針中淬滅基團,釋放熒光

 

客戶測試案例展示

 

客戶采用翌圣Bsu DNA polymerase (Large fragment, 5 U/μL)、T4 UvsX Recombinase (2 μg/μL)、T4 UvsY protein (2 μg/μL)、T4 gene 32 protein (gp 32)、肌酸激酶Creatine Kinase (2 μg/μL) 進行RPA擴增反應,得到正確的目的條帶,且條帶清晰、明亮,結果表明,PRA技術核心酶原料可實現高效RPA等溫擴增。

圖3 客戶測試翌圣重組酶聚合酶核心酶原料擴增結果圖

注:2、4為陽性實驗組;1、3為陰性對照組

 

參考文獻

[1] Zhao Y, Chen F, Li Q, Wang L, Fan C. Isothermal Amplification of Nucleic Acids. Chem Rev. 2015 Nov 25;115(22):12491-545. doi: 10.1021/acs.chemrev.5b00428. Epub 2015 Nov 9. PMID: 26551336.

[2] 王亞楠, 陳昌國. 重組酶聚合酶擴增技術研究進展[J]. 醫學雜志, 2021, 46(5):8.



會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
產品對比 二維碼

掃一掃訪問手機商鋪

對比框

在線留言