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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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Taq DNA聚合酶的非特異擴增是PCR實驗中的常見問題，非特異擴增直接影響檢測結果的判讀并且會導致擴增靈敏度下降，甚至目標片段的得率下降等。利用酶修飾劑在常溫下封閉Taq DNA聚合酶酶活中心，抑制常溫下Taq酶的DNA聚合酶活性，是目前抑制非特異性擴增的方式。翌圣開發的雙封閉抗體，不僅可以封閉Taq DNA聚合酶的聚合酶活性，還能同時封閉Taq DNA聚合酶的外切酶活性，雙管齊下，既能有效防止錯配或引物二聚體引起的非特異性擴增，又能防止物料降解產生非特異信號，雙重提升試劑特異性，使檢測試劑在運輸或室溫使用過程中都能夠從容應對。
圖1.Yeasen雙封閉熱啟動Taq酶抗體產品
注：產品號 - CN202010666417.7
擴增特異性——雙封閉抗體可在低溫時同時封閉聚合酶和外切酶活性，能有效避免非特異性擴增，提高擴增特異性
檢測靈敏度——熱啟動形式增加了引物與微量的正確模板碰撞退火的效率，從而可保證低豐度基因有效檢出，靈敏度更高
優秀產品穩定性——37℃放置5天、4℃放置10天性能穩定
基線平穩線性好——解決了基線上漂問題，線性好
酶活釋放速度快——95℃下加熱20 s即可釋放95%以上酶活
酶類適用范圍廣——野生型和突變型Taq酶均適用，每mg抗體可封閉4-10 KU Taq酶（針對不同類型的Taq酶略有不同）
將合成的引物探針分別配于未封閉以及雙封閉抗體封閉的Taq DNA聚合酶的反應液中，40℃反應，檢測兩者熒光信號，發現雙封閉抗體可有效封閉Taq DNA聚合酶的外切酶活性。
圖2.雙封閉抗體外切酶活性封閉效率檢測
分別用翌圣雙封閉抗體以及T公司抗體對Taq 酶封閉后通過ARMS-PCR技術檢測陽性樣本，發現翌圣雙封閉抗體封閉的Taq酶在ARMS-PCR擴增中分型準確，靈敏度更高。
圖3.ARMS-PCR擴增曲線圖
用傳統封閉抗體與雙封閉抗體分別封閉Taq DNA聚合酶，配置成含引物探針的全預混液，在4℃放置10天或在37℃放置1、3、5天，擴增10000拷貝ASF質粒，發現擴增曲線和Ct值無明顯變化。
圖4.4℃傳統封閉抗體(A)、雙封閉抗體(B)封閉反應液擴增10000拷貝ASF質粒擴增曲線圖
圖5.37℃傳統封閉抗體(A)、雙封閉抗體(B)封閉反應液擴增10000拷貝ASF質粒擴增曲線圖
某些引物配合特定buffer和儀器時，會出現基線上漂的情況，但雙封閉抗體能解決基線上漂問題，更有利于基線平穩。
圖6.N基因(A)、ACT基因(B)擴增曲線圖
用雙封閉抗體封閉的反應液擴增100000、10000、1000、100拷貝ASFV/ACT雙質粒，制作標準曲線。由圖7可以看到，兩者線性均良好。
圖7. 雙封閉反應液制作ASFV基因、ACT基因標準曲線圖
分別用進口T公司抗體和翌圣雙封閉抗體（Cat#31303）封閉Taq酶，并在95℃下熱激20 s，檢測酶活。可以看到95℃熱激20 s后，31303可釋放95%以上的酶活，與T公司抗體相當。
表1.95℃下熱激20 s酶活
翌圣雙封閉抗體（Cat#31303）分別封閉三種類型Taq酶（野生型+2種突變型），封閉比例為1μg : 5U，測量熒光值以及封閉效率。發現對于不同類型的Taq酶，翌圣雙封閉抗體（Cat#31303）封閉效果均較好。
表2.不同類型Taq酶的封閉效率
以水為模板作為陰性對照，小鼠基因組為模板作為陽性對照，擴增不同批次的31303，觀察條帶，發現樣品未擴增出目的片段，說明抗體不存在小鼠基因組殘留。
圖8 小鼠基因組殘留檢測圖
注：-為陰性對照，+為陽性對照，1-5為31303不同批次樣品
產品定位 | 產品名稱 | 產品貨號 |
聚合酶與外切酶活性雙封閉抗體 | Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq 酶單克隆抗體 | 31303ES |
聚合酶活性封閉抗體 | Hieff® anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq酶單克隆抗體 | 31301ES |
外切酶活性封閉抗體 | Hieff® anti-exonuclease of Taq Antibody Taq酶5'→3'外切酶單克隆抗體 | 31302ES |
