聯(lián)系電話
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
- 聯(lián)系人：
- 曹女士
- 電話：
- 400-6111-883
- 手機(jī)：
- 售后：
- 4006-111-883
- 傳真：
- 86-21-34615995
- 地址：
- 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號(hào)3樓
- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
掃一掃訪問(wèn)手機(jī)商鋪
類器官培養(yǎng)指南大全
—— 一文帶您深度了解類器官
類器官(Organoid)是在體外，經(jīng)過(guò)3D培養(yǎng)，能夠在體外模擬正常（或疾病）狀態(tài)下體內(nèi)器官（或組織）的三維結(jié)構(gòu)和生理功能。通俗點(diǎn)講，類器官是三維細(xì)胞培養(yǎng)物，將干細(xì)胞培養(yǎng)于基質(zhì)膠中，在化學(xué)小分子抑制劑/激活劑、細(xì)胞因子、培養(yǎng)基添加劑等物質(zhì)作用下經(jīng)過(guò)培養(yǎng)得到的相應(yīng)器官類似的組織結(jié)構(gòu)。
類器官擁有自我更新能力，能維持來(lái)源組織的生理結(jié)構(gòu)和功能，享有“培養(yǎng)皿中的微器官"之稱。利用干細(xì)胞的自我更新、分化能力以及自我組織能力，類器官可冷凍保存用作生物庫(kù)，也能無(wú)限擴(kuò)增。類器官高度復(fù)雜，相對(duì)于2D細(xì)胞，更接近于體內(nèi)狀態(tài)。
圖1. 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞的類器官培養(yǎng)[1]
類器官的特點(diǎn)是能更好地模擬體內(nèi)環(huán)境，適用于分子和細(xì)胞生物學(xué)分析，在動(dòng)物和細(xì)胞水平之間，為腫瘤研究、藥物篩選、再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域提供了一個(gè)更好的解決方案，已被廣泛應(yīng)用于功能組織誘導(dǎo)、疾病模型建立、藥物篩選、抗炎試驗(yàn)、臨床端研究等多個(gè)方面的研究，在基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化應(yīng)用中具有很大的應(yīng)用前景。
隨著類器官培養(yǎng)系統(tǒng)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，類器官培養(yǎng)已用于各種組織和器官，包括腸道（小腸/結(jié)腸）、胃、肝臟、心臟、肺、前列腺、胰腺、腎臟、乳腺、腦類、視網(wǎng)膜以及內(nèi)耳等。
以腫瘤干細(xì)胞為來(lái)源的類器官也開(kāi)始在幫助了解腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制、篩選藥物敏感性、促進(jìn)精準(zhǔn)醫(yī)療與個(gè)性化診療方面展現(xiàn)出巨大潛力。來(lái)自Cell、Science多篇文獻(xiàn)顯示，類器官在預(yù)測(cè)抗癌藥物有效性上，具有的靈敏度和特異性。近來(lái)，腫瘤類器官已表現(xiàn)出預(yù)測(cè)患者對(duì)癌癥藥物的反應(yīng)、幫助制定個(gè)性化用藥方案方面的作用。
1. 研究發(fā)育機(jī)制：類器官具有的分化能力，可用于胚胎發(fā)育過(guò)程及其機(jī)制的研究。
調(diào)控Wnt、BMP等信號(hào)通路誘導(dǎo)的過(guò)程，可研究腦類、胰腺和胃等器官的發(fā)育。[2][3][4]
2. 建立疾病損傷模型：類器官誘導(dǎo)的特定組織或器官，可用于特定疾病模型的研究。
趙冰、林鑫華團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用人源類器官感染模型研究(SARS-CoV-2)感染和損傷肝臟的分子機(jī)制，為致病機(jī)制研究和后續(xù)藥物開(kāi)發(fā)提供了重要工具。[5]
北大生科院鄧宏魁研究組用小分子和細(xì)胞因子來(lái)刺激，在體外構(gòu)建了具有損傷再生特征的新型小腸類器官—Hyper類器官。該類器官具有能夠長(zhǎng)期傳代擴(kuò)增并保持基因組，促進(jìn)結(jié)腸組織的損傷修復(fù)，減輕急性結(jié)腸炎動(dòng)物模型的病理學(xué)癥狀等特點(diǎn)。[6]
3. 再生醫(yī)學(xué)：干細(xì)胞來(lái)源的類器官，能夠修復(fù)或替代受損或病變的組織以恢復(fù)正常的組織功能，在細(xì)胞療法上具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，包括用于其他神經(jīng)退行性疾病、糖尿病、心血管疾病、視網(wǎng)膜病變和脊柱損傷等。
作為再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一種新型治療方式—DA01，利用小分子SB-431542 (Cat#53004ES)、LDN193189 (Cat#53012ES)、CHIR-99021 (Cat#53003ES)和Y-27632 (Cat#53006ES, Cat#52604ES)以及Sonic Hedgehog (Shh)蛋白(Cat#92566ES, Cat#92589ES)，刺激多能干細(xì)胞分化為多巴胺能神經(jīng)元，并移植入晚期帕金森病患者大腦的受傷區(qū)域內(nèi)，為該病的治療提供新的方向和思路。[7]
4. 藥物毒性和功效測(cè)試：利用類器官來(lái)驗(yàn)證新藥在特定器官或組織的藥代毒性，為新藥研發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。
使用Hyman腎臟類器官來(lái)驗(yàn)證Cisplatin（順鉑）的腎毒性。[8]
5. 藥物篩選：來(lái)源于干細(xì)胞的類器官能夠用于藥物反應(yīng)的離體測(cè)試，為藥篩提供理論支持。
結(jié)腸類器官可用于研究CFTR突變患者的用藥方案，腫瘤類器官可用于評(píng)估患者的個(gè)體化用藥情況。[9]
正常類器官主要來(lái)源于干細(xì)胞，干細(xì)胞包括多能干細(xì)胞（Pluripotent stem cells, PSCs）和成體干細(xì)胞（Adult stem cells, ASCs），其中多能干細(xì)胞包括胚胎干細(xì)胞（Embryonic stem cells, ESCs）、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Induced pluripotent stems cells, iPSCs）。成體干細(xì)胞相比多能干細(xì)胞，優(yōu)勢(shì)是建模簡(jiǎn)便快捷，但劣勢(shì)是構(gòu)建的類器官結(jié)構(gòu)相對(duì)比較簡(jiǎn)單。多能干細(xì)胞構(gòu)建的類器官結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜。
類器官培養(yǎng) | 所需小分子化合物 | 所需細(xì)胞生長(zhǎng)因子 | 培養(yǎng)基及添加劑 |
| Y-27632、SB-202190、A 83-01、Gastrin、Nicotinamide | EGF、Noggin、R-Spondin 1、Wnt-3a | HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素、N-2 |
| Y-27632、SB-202190、A 83-01、Gastrin I、Nicotinamide | FGF-10、EGF、Noggin、R-Spondin 1、Wnt-3a | HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素、N-2 |
| Y-27632、A 83-01、DAPT、Forskolin、Gastrin、Nicotinamide、Prostaglandin E2 | BMP-4、EGF、FGF-basic 、FGF-10、HGF、Noggin、Wnt-3a | N-2、HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素 |
| CHIR-99021、Retinoic Acid | BMP-2、BMP-4、BMP-7、FGF-basic、FGF-9 | HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素 |
| CHIR-99021、SB-431542 | Activin A、FGF-basic、FGF-4、Noggin | HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素 |
| Gastrin I、A 83-01、Nicotinamide | FGF-10、EGF、Noggin、R-Spondin 1、Wnt-3a | HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素 |
| Y-27632、SB-202190、A 83-01、Nicotinamide、Prostaglandin E2、Testosterone | EGF、Activin A、FGF-basic、FGF-10、Noggin、R-Spondin 1、Wnt-10b | HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素 |
| Y-27632 | Here gulin β-1、R-Spondin 1、R-Spondin 2、Noggin、EGF、 FGF-basic、FGF-10、Wnt-3a、Prolactin | HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素 |
| CHIR-99021、Y-27632 | SHH、Wnt-3a | HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素 |
| SB-431542、A 83-01 | BMP-4、 FGF-basic | HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素 |
| Y-27632、MK-2206、GDC-0068、Dorsomorphin | FGF-basic、Noggin、DKK-1、 EGF、BDNF、GDNF | B-27、HEPES、L-alanyl-L-glutamine solution、青霉素-鏈霉素 |
類器官培養(yǎng)中常用的小分子（匯總）：超實(shí)用，別忘了收藏哦！
? Y-27632 (Cat#53006ES, Cat#52604ES) : 是Rock的強(qiáng)效抑制劑，對(duì)p160ROCK (Ki=140 nM)和ROCK-II (IC50=800 nM)產(chǎn)生ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用, 也抑制PRK2 (IC50=600 nM)，一般在種板培養(yǎng)的第一次加入，后續(xù)換液培養(yǎng)可不添加。Y-27632 (10 µM)處理人胚胎干細(xì)胞1 h，可抑制干細(xì)胞的凋亡，提高克隆效率，延長(zhǎng)細(xì)胞的傳代。
推薦工作濃度：10 μM
? SB-202190 (Cat#53005ES) : 是一種高效的p38 MAPK激酶抑制劑，靶向作用p38α/β。SB202190可誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的自我更新，可用于胃腸道、乳腺類器官的培養(yǎng)。
推薦溶解濃度：10 mg加入3.018 mL的DMSO溶液溶解到10 mM，-20℃分裝保存。
推薦工作濃度：10 μM
? CHIR-99021 (Cat#53003ES) : 是一種氨基嘧啶衍生物, 作為GSK-3 (GSK3α/β)抑制劑，可誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向內(nèi)胚層分化，在腎臟和視網(wǎng)膜類器官培養(yǎng)中用到。CHIR-99021和其他試劑結(jié)合使用，能刺激體細(xì)胞重編程為干細(xì)胞。
推薦溶解濃度：5 mg加入3.58 mL的DMSO溶液溶解到3 mM，-20℃分裝保存。
推薦工作濃度：3 μM
? A 83-01 (Cat#53002ES) : 是Activin/NODAL/TGF-β通路抑制劑，抑制ALK5/4/7激酶活性，一般用于肝臟、前列腺以及乳腺類器官的培養(yǎng)，常被用于抑制iPSCs的分化，維持體外細(xì)胞的自我更新。
推薦溶解濃度：5 mg加入5.93 mL的DMSO溶液溶解到2 mM，-20℃分裝保存。（特別注意：該產(chǎn)品在溶液狀態(tài)下不穩(wěn)定，建議現(xiàn)配現(xiàn)用。）
推薦工作濃度：2 μM
? Gastrin I (Cat#53007ES) : 胃泌素是一種內(nèi)源性胃腸肽激素，刺激胃壁細(xì)胞分泌胃酸，是一種非常重要的多肽類激素。胃泌素與膽囊收縮素B受體(CCKBR)結(jié)合，提高細(xì)胞內(nèi)Ca2+、促進(jìn)磷酸肌醇的生成和蛋白激酶C的激活。胃泌素還參與胃上皮細(xì)胞的增殖和分化，并用于胃腸道類器官的研究。腸道及肝臟類器官培養(yǎng)時(shí)，需要添加胃泌素來(lái)延長(zhǎng)類器官的存活時(shí)間。
推薦溶解濃度：1 mg加入2.38 mL的1%氨水溶液溶解到0.2 mM，-20℃分裝保存。
推薦工作濃度：10 nM
? Nicotinamide煙酰胺(Cat#51402ES) : 是一種B3維生素，參與多種酶促氧化還原反應(yīng)，可用于胃腸道、肝臟以及乳腺類器官的培養(yǎng)。煙酰胺與細(xì)胞因子、其他生化試劑一起能發(fā)揮抗炎特性，并促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化成胰島素生成細(xì)胞，抑制sirtuins活性，并用于促進(jìn)類器官的形成和延長(zhǎng)類器官的壽命。
推薦溶解濃度：100 mg加入8.19 mL的H2O（或DMSO）溶解到100 mM，-20℃分裝保存。
推薦工作濃度：10 mM
? Forskolin毛喉素(Cat#51001ES) : 可以激活腺苷環(huán)化酶，常用于提高細(xì)胞內(nèi)cAMP的水平。Forskolin誘導(dǎo)多種類型細(xì)胞的分化并激活PXR和FXR，具有血小板抗凝集和降壓作用，與其他小分子聯(lián)合使用時(shí)，可誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞重編程為iPSCs。肝臟類器官培養(yǎng)的過(guò)程中必須添加該物質(zhì)。
推薦工作濃度：1-10 μM
? Prostaglandin E2 (Cat#60810ES) : 前列腺素E2 (PGE2)調(diào)節(jié)許多生理系統(tǒng)，與特異的受體結(jié)合后可介導(dǎo)細(xì)胞增殖、分化，在肝臟類器官和前列腺類器官培養(yǎng)時(shí)需要添加，與平滑肌疏松、炎癥、生育、睡眠周期調(diào)節(jié)和胃粘膜完整性有關(guān)。
推薦溶解濃度：1 mg加入0.28 mL的DMSO溶液溶解到10 mM，-20℃分裝保存。
推薦工作濃度：500 nM
? N-acetyl-L-Cysteine (Cat#50303ES) : N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)是抗氧化劑谷胱甘肽的前體，具有抗氧化作用，也是一種ROS抑制劑，抑制神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，在大多數(shù)類器官的培養(yǎng)過(guò)程中都需要添加該物質(zhì)。
推薦溶解濃度：2 g加入24.51 mL的H2O（或DMSO）溶解到500 mM，-20℃分裝保存。
推薦工作濃度：1 mM
小分子化合物（抑制劑/激活劑）
小分子化合物產(chǎn)品可參與Yeasen發(fā)SCI贏獎(jiǎng)勵(lì)金活動(dòng)
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
Retinoic acid | 53001ES | 100 mg/500 mg/1 g |
A 83-01 | 53002ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
CHIR-99021 | 53003ES | 2 mg/5 mg/10 mg |
SB-431542 | 53004ES | 5 mg/10 mg/50 mg |
SB-202190 | 53005ES | 5 mg/10 mg/25 mg |
Y-27632 | 53006ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
Gastrin I(human) | 53007ES | 1 mg/5 mg |
MK-2206 2HCl | 53008ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
GDC-0068(Ipatasertib; RG7440; GDC0068) | 53009ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
Dorsomorphin dihydrochloride (Dorsomorphin 2HCl) | 53010ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
Y-27632 dihydrochloride | 52604ES | 5 mg/10 mg/25 mg |
Nicotinamide煙酰胺 | 51402ES | 1 g/5 g |
DAPT (GSI-IX, LY-374973) | 52104ES | 5 mg/25 mg |
Forskolin毛喉素 | 51001ES | 10 mg/50 mg/100 mg/1 g |
Prostaglandin (PG) E2 前列腺素E2 | 60810ES | 1 mg |
Testosterone睪酮 | 60803ES | 1 g/5 g |
NAC（N-乙酰-L-半胱氨酸） | 50303ES | 2 g |
RepSox | 53016ES | 5 mg/10 mg/25 mg |
LDN193189（DM-3189） | 53012ES | 5 mg/10 mg |
培養(yǎng)基及添加劑
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
HEPES Free Acid 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí) | 60110ES | 100 g/500 g |
L-alanyl-L-glutamine solution，200mM L-丙氨 | 60701ES | 20 mL/100 mL/500 mL |
Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell | 60162ES | 100 mL |
B-27無(wú)血清培養(yǎng)基，50× | 60703ES | 10 mL |
N-2 supplement,serum free,100X N-2無(wú)血清添加 | 60706ES | 5 mL |
細(xì)胞因子
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
Recombinant Human Activin A | 91702ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human BMP-2 | 92051ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human DKK-1 | 92275ES | 20 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human EGF | 92701ES | 100 μg/500 μg |
Recombinant Human bFGF | 91330ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human FGF-4 | 91303ES | 5 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human FGF-9 | 91305ES | 5 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human FGF-10 | 91306ES | 5 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human GDNF | 92102ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human Noggin | 92528ES | 5 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human NRG1-beta1 | 92711ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human R-Spondin 1 | 92274ES | 100 μg/1 mg |
Recombinant Human Shh | 92566ES | 5 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human BAFF | 90604ES | 5 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human sCD40 Ligand | 90606ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human BMP-4 | 92053ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human HGF | 92055ES | 5 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human BDNF | 92129ES | 5 μg/20 μg/100 μg |
小課堂：小分子化合物是指分子量小于1000 Da（尤其小于500 Da），具有生物學(xué)活性的化合物。小分子化合物與細(xì)胞因子和蛋白不同，小分子可以透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。小分子化合物的作用靶點(diǎn)眾多，已廣泛應(yīng)用于干細(xì)胞、類器官、免疫學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、表觀遺傳學(xué)、細(xì)胞凋亡、離子通道、腫瘤學(xué)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等生命科學(xué)中諸多重要的研究領(lǐng)域。
翌圣生物的小分子產(chǎn)品線覆蓋全、種類多，產(chǎn)品純度高、經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)檢，*，專業(yè)的售前售后技術(shù)團(tuán)隊(duì)，產(chǎn)品價(jià)格優(yōu)、性比價(jià)高。我們堅(jiān)持以高品質(zhì)的產(chǎn)品服務(wù)于客戶，助力您的科學(xué)研究！
