欧美日韩成人在线,337P粉嫩日本亚洲大胆艺术,色综合久久久无码中文字幕波多,麻豆人妻少妇精品无码专区

翌圣生物科技(上海)股份有限公司

初級會員·13年

聯系電話

400-6111-883

您現在的位置: 首頁> 技術文章 > 基質膠實驗應用——血管生成
初級會員·13年
人:
曹女士
話:
400-6111-883
機:
后:
4006-111-883
真:
86-21-34615995
址:
上海市浦東新區天雄路166弄1號3樓
址:
www.yeasen.com

掃一掃訪問手機商鋪

基質膠實驗應用——血管生成

2022-8-1  閱讀(1045)

分享:
血管生成(angiogenesis )會與傷口愈合、炎癥、類風濕性關節炎、糖尿病視網膜病變、黃斑變性和腫瘤生長等存在著密切的關聯。在生物體生長過程中,血管生成是新組織生長的重要組成部分。在成年期,除在特殊器官中受到嚴格調節的周期性事件外,由于促血管生成和抗血管生成內源性因素之間的平衡,幾乎每個正常組織都缺乏大量的生理性血管生成。當促血管生成方向的平衡被打亂時,微血管內皮細胞 (EC) 會轉變為血管生成表型,從而開始血管生成反應,該反應可以被消除或加速。


在研究過程中所涉及到血管生成實驗,傳統的體內血管生成實驗方法有:角膜微袋、腸系膜、海綿/基質植入物、圓盤分析 (DAS)、斑馬魚等。但這些實驗不僅技術要求高,成本昂貴,耗時長,還會涉及到道德倫理問題等。相較于體內做血管生成實驗,在體外利用特殊基質維持細胞生成血管是一種比較經濟和實用的實驗[1],其中的細胞生長維持基質物就是來源與EHS小鼠腫瘤中提取出的可溶性基底膜制備物——基質膠。


基質膠主要成分由層粘連蛋白,Ⅳ型膠原,硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和巢蛋白等組成,還包含生長因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、組織纖溶酶原激活物和EHS腫瘤自身含有的其他生長因子。為組織和細胞提供支撐、抗拉強度和支架支撐,也可以作為細胞粘附和運動的三維亞結構以及生長因子、趨化因子和細胞因子的儲存庫,同時可作為細胞形態發生和分化的信號等。翌圣生物開發生產的CeturegelTM基質膠不含LDEV(乳酸脫氫酶增高病毒),超低內毒素含量,并全部經過支原體檢測保證無支原體污染,包括基本濃度、高濃度、低生長因子等不同類型基質膠。 
 




應用方向

 


產品特點

 
安全性高:不含LDEV(乳酸脫氫酶增高病毒)
濃度多樣性:濃度范圍在8~20 mg/mL之間
批次穩定性好:嚴格生產質檢過程保證批次間性能穩定
低內毒素:內毒素含量≤4 EU/mL
污染物檢測: 經檢測無支原體和細菌、真菌殘留
單批產量高:單批產量在L級別以上
兼容性好:可與任何類型的細胞培養基兼容



血管生成實驗


實驗步驟


01

基質膠準備


  1. 實驗前一天,從冷凍冰箱內取出CeturegelTM基質膠并置于4℃冰箱過夜融化,同時對所使用的耗材預冷處理。

  2. 實驗前將CeturegelTM基質膠始終放置在冰盒中。

  3. 打開血管生成載玻片滅菌包裝,取出載玻片。

  4. 向每孔內加入10 μl CeturegelTM基質膠,注意加入CeturegelTM基質膠時槍頭要垂直于內孔的正上方,防止有基質膠流經上孔而留下殘膠。


02

凝膠


  1. 首先蓋上載玻片的蓋子,準備一個10 cm的培養皿,放入浸過水的紙巾,制成一個濕盒。

  2. 將載玻片放入培養皿中,蓋上培養皿蓋。

  3. 將整個培養皿放入CO2培養箱中,靜置30min左右等待膠凝結,同時準備細胞懸液。


03

細胞鋪板



  1. 將消化后的細胞制備成密度為2*105  cells/ml細胞懸液,充分混勻。

  2. 將含有已經凝固成膠狀的血管載玻片取出。

  3. 每孔加入50μl的細胞懸液,注意保持槍頭垂直在上孔的上方,不要接觸下孔的凝膠。

  4. 加入細胞培養基,蓋上蓋,靜置,一段時間后,所有細胞都會沉下去落在基質膠的表面。


04

圖像采集


按照細胞生長速度定時觀察拍照、留存圖像。


免疫熒光染色(選做)
  1. 小心移除孔內培養基,切勿碰觸膠或者細胞網絡。用無血清培養基稀釋鈣黃綠素使其終濃度為6~8 µg/ml。

  2. 加入細胞染液使其*浸沒細胞,室溫,避光孵育30~40分鐘。

  3. PBS清洗三次,注意PBS要緩緩加入上孔,以免沖擊掉細胞。

  4. 使用Ex=485 nm,Em=529 nm波長進行熒光觀察


05

結果統計


并對其成管長度、覆蓋面積、成環數、結點數進行測量和記錄,并進行統計分析。
 
圖片
圖:血管生成結果圖
 
圖片
圖:血管免疫熒光染色圖[2]



FAQ


01 拿到的基質有色差的變化(淡黃色到深紅色)是什么原因?

對于含酚紅的基質膠主要原因是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2作用引起的,但是與5%CO2平衡后色差即會減少。凍融后,輕輕搖晃試劑瓶使基質膠分散均勻。


02 基質膠的操作要注意哪些事項?

所有操作需在無菌環境下進行,應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀。


03 基質膠的如何分裝凍存使用?

可將凍融后的CeturegelTM基質膠分裝在多個小管,所有分裝均需用預冷的凍存管,迅速冷凍并保存,避免多次凍融。所有涉及到使用的物品在使用前需預冷,使用預冷的移液管、吸頭及小管等操作基質膠。


[1] Norrby K. In vivo models of angiogenesis. J Cell Mol Med. 2006 Jul-Sep;10(3):588-612. doi: 10.1111/j.1582-4934.2006.tb00423.x.
[2] Benton G, Arnaoutova I, George J, Kleinman HK, Koblinski J. Matrigel: from discovery and ECM mimicry to assays and models for cancer research. Adv Drug Deliv Rev. 2014 Dec 15;79-80:3-18. doi: 10.1016/j.addr.2014.06.005.



相關產品


產品類型

產品名稱

編號

規格

基本濃度

CeturegelTM Matrix LDEV-Free基質膠

40183ES08/10

5/10 mL

CeturegelTM Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠

40184ES08/10

5/10 mL

低生長因子

CeturegelTM Matrix GFR,LDEV-Free 基質膠

40185ES08/10

5/10 mL

CeturegelTM Matrix GFR, Phenol Red-FreeLDEV-Free 基質膠

40186ES08/10

5/10 mL

高濃度

CeturegelTM Matrix High ConcentrationLDEV-Free 基質膠

40187ES08/10

5/10 mL

CeturegelTM Matrix High ConcentrationPhenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠

40188ES08/10

5/10 mL

CeturegelTM Matrix High Concentration,GFRLDEV-Free 基質膠

40189ES08/10

5/10 mL

干細胞專用

CeturegelTM Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基質膠

40190ES08/10

5/10 mL

類器官專用

CeturegelTM Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基質膠

40191ES08/10

5/10 mL




會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
產品對比 二維碼

掃一掃訪問手機商鋪

對比框

在線留言