一、背景及概述

內皮細胞系指血管、淋巴管的內膜上皮將內腔面覆蓋的細胞。多數是單層扁平上皮屬中胎葉性的上皮。血液循環和組織中大單核的游走的吞噬細胞有人認為是來自增生的血管內皮。小鼠肺微血管內皮細胞分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。微血管內皮細胞密切參與包括再生、發育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應。細胞呈梭形或多角形，形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。小鼠肺微血管內皮細胞構成半選擇性屏障，該屏障對于肺氣體交換，調節液體和可溶物在血液與肺間質之間的流動具有重要意義。

二、細胞傳代培養

將長成單層的原代細胞加0.5g/L胰蛋白酶0.2g/LEDTA后置37℃培養箱進行消化5min左右，鏡下觀察，當細胞間連接疏松時立即加入ECM培養基，吹打使細胞脫落并充分混勻，按1∶1比例傳代。

三、細胞純化

肺微血管內皮細胞在組織塊取出后，可以看到局部有成纖維細胞的生長，采取機械刮擦的方法和ECM培養基的定向分選功能進行純化。

四、細胞鑒定

用細胞免疫組化法檢測ⅧF-Ag和CD31膜抗原將匯合度達80%的96孔板細胞，PBS洗3次。40g/L多聚甲醛固定30min。ⅧF-Ag組需加2。5mL/LTritonx-100，30～40μL/孔，10min，PBS洗5min×3次。然后加H2O2(300mL/L的H2O2甲醇=1∶50)，室溫30min，PBS洗5min×3次。BSA封閉30min。吸去BSA，直接加CD31和ⅧF-Ag，對照組加相同體積的PBS，蓋底即可，4℃過夜。第2日，吸去一抗，PBS洗5min×3次。加二抗，室溫20min，PBS洗5min×3次。加SABC30～40μL/孔，室溫20min，PBS洗5min×4次。加DAB30～40μL/孔，5～30min，顯微鏡觀察染色程度。PBS洗3～5次。蘇木精染色1～2min，用熒光倒置顯微鏡拍照，BiosensDigitalImagingSystem灰度掃描儀掃描以檢測ⅧF-Ag和CD31膜抗原水平。

五、相關研究

有實驗研究藻酸雙酯鈉(PSS)對脂多糖(LPS)所致的小鼠肺微血管內皮細胞(PMVEC)損傷的保護作用。方法體外培養PMVEC，隨機將細胞分為空白對照組(C組)、LPS刺激組(L組)、PSS+LPS組(LP組)。采用MTT法檢測PSS對LPS刺激PMVEC的細胞活力的影響，虎紅染色法測定中性粒細胞(PMN)對PMVEC黏附數量的影響，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測3組培養上清液中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和細胞間黏附分子-1(ICAM-1)的濃度。結果PSS能抑制LPS所致的PMVEC細胞活力下降；與C組比較，L組的PMVEC與PMN的黏附數量明顯增加，TNF-α和ICAM-1的表達顯著增加；與L組比較，PSS預處理1h能顯著降低LPS所致的PMVEC與PMN的黏附，LP組的TNF-α和ICAM-1表達顯著降低。結論PSS能抑制LPS對PMVEC的損傷及PMVEC與PMN的黏附，其作用機制可能與降低ICAM-1和TNF-α的表達有關。

此外，還有實驗研究熱打擊及10%中暑小鼠血清刺激肺微血管內皮細胞(PMVECs)對PMVECs表達血管內皮黏附分子(VCAM-1)和細胞間黏附分子(ICAM-1)水平及其黏附單核細胞能力的影響。

北京百歐博偉生物技術有限公司的微生物菌種查詢網提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務,是中國微生物菌種保藏中心的服務平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細胞、培養基為一體的大型微生物查詢類網站，自設設備及技術的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！