酶標板實驗優化:加樣、洗滌、讀板全流程技巧
以下是天津本生對酶標板實驗全流程優化的關鍵技巧,涵蓋加樣、洗滌和讀板三大核心環節:
一、加樣優化技巧
精準加樣控制?
使用多道移液器(誤差<2%),單次加樣時間控制在10分鐘內,避免預孵育時間差異影響重復性
高濃度樣本需預稀釋(如1:20 PBS稀釋),溶血樣本應棄用
防蒸發處理?
孵育時反應板需加蓋密封膜,并置于鋪有濕布的密閉盒內保持濕度
液體樣本4℃保存≤1周,-80℃長期保存需密封防凍干
二、洗滌關鍵參數
操作要點 優化方案 注意事項
洗滌液配制 Tween-20濃度0.05%-0.1%,含0.5M NaCl 避免使用含疊氮鈉的緩沖液(HRP系統)
洗滌次數 常規3-5次,高背景樣本增至8次 競爭法需控制單次洗滌≤2分鐘
拍干方式 倒置拍板力度均勻,使用無屑濾紙 垂直猛拍易導致包被物脫落
三、讀板質量控制
顯色控制?
底物加入后每10分鐘觀察顯色,強陽性孔需提前終止
雙波長檢測(主450nm/參比630nm)可減少孔間干擾
儀器校準?
讀板前預熱酶標儀,設置溫控參數(如37℃±0.5℃)
邊緣孔數據棄用,僅分析中間60孔保證一致性
四、特殊樣本處理
高脂血樣本?:12000rpm離心10分鐘去除脂蛋白
組織勻漿?:添加RIPA裂解液后-80℃保存,避免反復凍融
流程銜接提示?:
洗滌后需立即進行下一步操作,酶標板干燥會導致復合物失活
自動化洗板機需定期校準吸液高度(距孔底0.5-1mm)
注:以上資料僅供參考,如需完整說明,建議聯系供應商獲取隨貨文件。
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