細(xì)胞作為生命體結(jié)構(gòu)與功能的最小獨立單元，始終是生命科學(xué)研究的基石，在探索生命奧秘的征程中占據(jù)核心地位：

1、科研領(lǐng)域：細(xì)胞的增殖分化、信號傳導(dǎo)、代謝調(diào)控等動態(tài)過程，為解析生理機制與疾病發(fā)生提供關(guān)鍵靶點，是揭秘生命進程的核心工具；

2、藥物研發(fā)：細(xì)胞模型是高通量篩選、毒性評估及藥效驗證的核心載體，從早期化合物篩選到臨床前研究，細(xì)胞活性檢測貫穿全程。隨著基因編輯（如 CRISPR）及細(xì)胞治療技術(shù)的革新，細(xì)胞更成為攻克疾病的前沿 “藥物”；

3、生產(chǎn)領(lǐng)域：細(xì)胞化身微型生物工廠，為科研工作者高效產(chǎn)出抗體、蛋白、多肽等科研試劑與藥物，驅(qū)動生命科學(xué)研究與產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化。

“我培養(yǎng)的細(xì)胞生長狀況如何？”，這是在實驗中當(dāng)細(xì)胞暴露于某種物質(zhì)或影響因素下，科研工作者要問的首要問題。這個問題可以通過對多種指征細(xì)胞活性的指標(biāo)進行檢測來回答，接下來小編將帶大家全面了解檢測細(xì)胞活性的三大類（共六種）方法，助力大家更好的選擇合適的方法，快速搞定細(xì)胞活力檢測。

1.明星方法，基于檢測細(xì)胞中ATP含量的方式測定細(xì)胞活性

細(xì)胞內(nèi)ATP（腺苷三磷酸）的含量是細(xì)胞能量代謝的直接指標(biāo)。ATP生物發(fā)光法通過測量細(xì)胞內(nèi)ATP的水平來評估細(xì)胞活性。這種方法操作簡便，整個方案簡化成“加入-孵育-讀取”三步驟，并且具有高靈敏度和寬動態(tài)范圍的特點，尤其適合于需要高通量，且需要高靈敏度檢測的實驗。

熒光素酶法檢測細(xì)胞活性原理圖

2.可與CTG-L試劑聯(lián)用，基于活細(xì)胞蛋白酶活性，非裂解熒光法測定細(xì)胞活性

對于細(xì)胞活性檢測，有時需要有內(nèi)參對照，由此產(chǎn)生 multiplex 分析需求，即對同一樣本進行多種分析方法同時檢測，且要求分析檢測方法相互不干擾，彼此檢測機理不同，如此可以進行相關(guān)對比，從而排除實驗因素外的數(shù)據(jù)差異。本試劑檢測原理是檢測活細(xì)胞內(nèi)一種保守蛋白酶，活性僅與完好的活細(xì)胞有關(guān)。可穿透細(xì)胞膜的活性底物進入活細(xì)胞后，被活細(xì)胞蛋白酶切割，產(chǎn)生熒光信號，信號的強度與活細(xì)胞數(shù)量呈正比。當(dāng)細(xì)胞膜的完整性喪失，并漏出到周圍培養(yǎng)基后，該活細(xì)胞蛋白酶的活性會由于環(huán)境與細(xì)胞內(nèi)環(huán)境不同而消失。本試劑與CTG-L系列熒光素酶試劑盒檢測原理不同，檢測方法也不同，可以檢測到更早期的輕微的細(xì)胞損害，兩個檢測試劑相容性好，可以進行 multiplex 檢測。此方法操作步驟簡單，“加入-孵育-讀取”三步驟即可完成實驗，適合高通量檢測。

活細(xì)胞蛋白酶活性檢測原題圖

3.傳統(tǒng)經(jīng)典方法，基于線粒體脫氫酶還原性，測定細(xì)胞活性

基于線粒體脫氫酶活性的細(xì)胞活性檢測方法，其機制主要依賴于線粒體脫氫酶在細(xì)胞代謝過程中的關(guān)鍵作用。這種酶位于線粒體內(nèi)膜，能夠催化底物（通常是涉及氧化還原反應(yīng)的化合物）的脫氫過程，將電子轉(zhuǎn)移給特定的電子受體（如MTT試劑中的顯色底物）。

當(dāng)細(xì)胞具有活性時，線粒體功能正常，脫氫酶活性較高，能夠高效地將底物還原，使底物發(fā)生顏色變化（如MTT被還原為紫色結(jié)晶甲瓚）。而當(dāng)細(xì)胞失去活性或活性降低時，線粒體功能受損，脫氫酶活性下降，底物還原反應(yīng)程度減弱，顏色變化程度也隨之降低。

由于檢測底物不同，此類方法又可細(xì)分為:
①MTT法：使用前需兩種組分預(yù)混，工作液可被線粒體脫氫酶催化產(chǎn)生不容易水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)，需換液溶解產(chǎn)物，測定570 nm吸光度；
②MTS法，MTT升級產(chǎn)品，使用前需兩種組分預(yù)混，工作液可被線粒體脫氫酶催化產(chǎn)生溶于水的甲瓚(Formazan)產(chǎn)物，無需更換溶液，更簡便，需測定490 nm吸光度；
③CCK-8法，MTT升級產(chǎn)品，可以直接加入到細(xì)胞樣品中,不需要預(yù)配各種成分，檢測快速，毒性非常低，其有效底物WST-8在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜染料，無需更換溶液，更簡便，需測定450 nm吸光度。
④阿爾瑪藍(lán)（Alamar Blue）法，主要成分為刃天青（resazurin），是一種細(xì)胞膜滲透性、無毒性且弱藍(lán)色熒光的指示劑，做為MTT的替代物，氧化態(tài)的刃天青呈紫藍(lán)色且基本無熒光，其還原態(tài)產(chǎn)物試鹵靈（resorufin）轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t色且高度熒光，產(chǎn)生的熒光強度與呼吸活細(xì)胞數(shù)量呈正比。阿爾瑪藍(lán)的顏色變化可通過普通分光光度計檢測吸光度變化，檢測波長為570 nm，參考波長為600 nm；阿爾瑪藍(lán)的熒光變化可通過熒光光度計檢測，激發(fā)波長在530~560 nm之間，發(fā)射波長為590 nm。

基于線粒體脫氫酶活性檢測細(xì)胞活性原理圖

以上三類就是目前檢測細(xì)胞活性的主要方法，小編也在這里匯總了這些方法的特點，更方便大家根據(jù)實際需求去選擇。

今天的講解就到這里，后續(xù)還會有細(xì)胞凋亡和毒性的檢測方法匯總，敬請期待~

Absin文獻獎勵重磅升級！

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...