Cosmo Bio的骨吸收檢測試劑盒是一種多組分試劑盒，可以用于破骨細(xì)胞的培養(yǎng)、分化和骨吸收定量評估。該試劑盒采用檢測熒光信號的方法，熒光信號來自于與平板結(jié)合的磷酸鈣釋放到培養(yǎng)基中的熒光胺標(biāo)記的硫酸軟骨素的積累。

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骨吸收檢測試劑盒利用熒光磷酸鈣(CaP)作為骨細(xì)胞吸收活性的底物。培養(yǎng)板(包含在試劑盒中，也可以單獨(dú)出售)預(yù)先包被有合成結(jié)晶碳酸磷灰石，該物質(zhì)是一種天然磷灰石的替代品。在使用前，CaP包被的板會結(jié)合熒光胺標(biāo)記的硫酸軟骨素(包含在試劑盒中，也可以單獨(dú)出售)。然后破骨細(xì)胞吸收會導(dǎo)致標(biāo)記的硫酸軟骨素從與板上結(jié)合的磷酸鈣中釋放出來。釋放的標(biāo)記硫酸軟骨素通過熒光測定來定量。該試劑盒還允許進(jìn)行傳統(tǒng)的Pit分析。另外值得注意的是，也有文獻(xiàn)(Heo, S. C. et al. Int J Mol Sci 22, 695 (2021)和Steller, D., Scheibert, A., Sturmheit, T. & Hakim, S. G. Sci Rep-uk 10, 16861 (2020))在細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中使用該試劑盒，CaP預(yù)包被板與trans-well小室一起使用。

● 產(chǎn)品優(yōu)勢：

?? 通過檢測培養(yǎng)基樣品的熒光來測定骨吸收過程

?? 獲得全-世界研究人員認(rèn)可的成熟方法，且不需要拍照

?? 便于使用的CaP預(yù)包被板孔

?? 組分都經(jīng)過無菌處理

?? 熒光激發(fā)和發(fā)射波長與FITC相同。請注意:使用不含酚紅的培養(yǎng)基

?? 檢測的同時(shí)允許顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)

?? 去除細(xì)胞后允許進(jìn)行Pit面積測定且可以使用圖像分析軟件

?? 適用于評估破骨細(xì)胞對雙膦酸鹽等藥物的反應(yīng)

● 產(chǎn)品使用實(shí)例

圖A. RAW264細(xì)胞與RANKL (100 ng/mL)在CaP包被的平板上培養(yǎng)6天的相差顯微鏡照片。OC表示觀察到破骨細(xì)胞樣細(xì)胞的位置。

圖B. 去除細(xì)胞后的平板照片。肉眼可觀察到Pits(左圖無RANKL；右圖有RANKL)。

圖C. 在CaP包被的平板上形成的Pits的顯微照片(用RANKL)。

圖D. Pits面積的RANKL依賴性增加結(jié)果(mean±S.D，n = 3)。

圖E. 二膦酸鹽帕米膦酸鹽對RANKL (100 ng/mL)誘導(dǎo)的CaP吸收的抑制作用結(jié)果。

● 使用該試劑盒的注意事項(xiàng)：

?? 使用不含酚紅的培養(yǎng)基來減少背景熒光。

?? 破骨細(xì)胞分化活性隨細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件而變化。已知含有HEPES的培養(yǎng)基可調(diào)節(jié)分化活性。在使用該試劑盒之前，我們建議您使用常規(guī)組織培養(yǎng)板來確認(rèn)您的培養(yǎng)基有促進(jìn)細(xì)胞分化的能力。

?? 避免板子受強(qiáng)光照射。

?? 為了有效刺激細(xì)胞，我們建議RANKL濃度≥ 100ng/ml。

?? 因?yàn)镽ANKL刺激會影響細(xì)胞附著，所以在更換培養(yǎng)基時(shí)要小心。

?? 由于熒光強(qiáng)度隨pH值而變化，并且在酸性條件下較低，我們建議在測量熒光強(qiáng)度時(shí)使用“骨吸收測定緩沖液”(貨號CSR-BRA-B1)。

?? 熒光胺標(biāo)記的硫酸軟骨素降低了破骨細(xì)胞的分化。然而，這種減少不足以影響一組雙膦酸鹽藥物的評估。但由于還是對骨吸收測量存在潛在影響，請您在評估已知與硫酸軟骨素相互作用的藥物時(shí)謹(jǐn)慎選擇該試劑盒。

?? 某些高濃度的雙膦酸鹽(≥ 100μM)會導(dǎo)致熒光胺標(biāo)記的硫酸軟骨素（FACS）從CaP包被的板子上釋放。

● 訂購詳情：

??骨吸收檢測試劑盒（Plate+FACS+Buffer）

??骨吸收檢測板子

??FACS和buffer

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