全自動氨基酸分析儀基于離子交換色譜原理,結合茚三酮柱后衍生和光度法檢測技術,實現對氨基酸的高效分離與定量分析。其核心在于利用陽離子交換樹脂對氨基酸的特異性吸附作用,結合流動相的pH梯度洗脫,實現復雜樣品中氨基酸的精準分離。
技術原理
氨基酸混合物在流動相(緩沖溶液)推動下,流經裝有陽離子交換樹脂的色譜柱。不同氨基酸因結構、酸堿性、極性差異,與樹脂中的交換基團發生離子交換,吸附能力不同。通過調節洗脫液的pH值和離子濃度,氨基酸按洗脫能力順序逐一釋放。洗脫出的氨基酸與茚三酮試劑在柱后反應器中混合,于115-120℃下發生顯色反應,生成紫色或黃色化合物。這些有色產物在570nm(紫色)和440nm(黃色)波長下的吸光度與氨基酸濃度呈線性關系,符合朗伯-比爾定律,從而實現定量分析。
工作流程
樣品處理:蛋白質樣品需經酸水解或酶解,將蛋白質分解為游離氨基酸。游離氨基酸樣品可直接上樣。
氨基酸分離:樣品注入色譜柱后,通過三梯度分離技術(溫度、濃度、pH梯度)優化分離效果,確保難分離組分(如色氨酸)的分離度。
檢測與數據處理:分離后的氨基酸與茚三酮反應生成有色產物,經可見光檢測器檢測吸光度。儀器自動繪制色譜圖,通過峰面積計算氨基酸含量,并生成定量報告。
該技術具有高靈敏度(檢測限可達3-50pmol)、高重現性(峰面積重現性RSD≤1%)和自動化程度高的特點,廣泛應用于食品、醫藥、農業等領域。
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