一、試劑盒概述

Annexin V-AbFluor™ 647 細(xì)胞凋亡/周期檢測試劑盒是一種用于高靈敏度檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的試劑盒。它通過 Annexin V 與磷脂酰絲氨酸（PS）的特異性結(jié)合，結(jié)合碘化丙啶（PI）雙染技術(shù)，實現(xiàn)凋亡早晚期細(xì)胞及死細(xì)胞的精準(zhǔn)區(qū)分，適用于流式細(xì)胞術(shù)與熒光顯微鏡檢測。

二、工作原理

• 細(xì)胞凋亡過程中的 PS 外翻：在正常細(xì)胞中，PS 位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，細(xì)胞凋亡時，PS 會從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到外側(cè)，暴露于細(xì)胞外環(huán)境。

• Annexin V 與 PS 結(jié)合：Annexin V 是一種依賴 Ca2?的磷脂結(jié)合蛋白，對 PS 具有高親和力。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡，PS 外翻至細(xì)胞膜外側(cè)時，Annexin V 可與其結(jié)合，從而識別凋亡細(xì)胞。

• PI 的染色作用：PI 是一種熒光核染料，不能穿透活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的完整細(xì)胞膜，但能透過晚期凋亡和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜，使細(xì)胞核染色。通過 Annexin V 和 PI 的聯(lián)合染色，可以區(qū)分活細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡或壞死細(xì)胞。

三、試劑盒組分及作用

• Annexin V 結(jié)合緩沖液（5×）：用于稀釋和重懸細(xì)胞，為 Annexin V 與 PS 的結(jié)合提供適宜的環(huán)境，包括適當(dāng)?shù)碾x子強度和 pH 值等，其成分和配比能穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，減少非特異性結(jié)合。

• Annexin V-AbFluor™ 647：是 Annexin V 與 AbFluor™ 647 熒光染料的標(biāo)記物。AbFluor™ 647 染料具有優(yōu)異的熒光性能，其激發(fā)波長為 650nm，發(fā)射波長為 665nm，相比其他類似染料，如 Alexa Fluor 647、Cy5、DyLight™ 649 等，具有更高的熒光強度和光穩(wěn)定性，能更清晰地標(biāo)記凋亡細(xì)胞。

• 碘化丙啶（PI）：PI 的激發(fā)波長為 535nm，發(fā)射波長為 617nm。活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞膜完整，PI 無法進入細(xì)胞內(nèi)，因此細(xì)胞核不被染色；而晚期凋亡和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜失去完整性，PI 可進入細(xì)胞與 DNA 結(jié)合，使細(xì)胞核發(fā)出紅色熒光。

四、檢測方法及優(yōu)勢

• 流式細(xì)胞術(shù)：可快速定量分析大量細(xì)胞的凋亡情況。通過設(shè)置不同對照樣品，如陰性對照細(xì)胞（不加染料）、單染 Annexin V-AbFluor™ 647 細(xì)胞、單染 PI 細(xì)胞，調(diào)整電壓和光補償后，能準(zhǔn)確區(qū)分四類細(xì)胞：活細(xì)胞（Annexin V-/PI-）、早期凋亡細(xì)胞（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡細(xì)胞（Annexin V+/PI+）和壞死細(xì)胞（Annexin V-/PI+）。

• 熒光顯微鏡檢測：適用于觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化和單個細(xì)胞的凋亡情況。對于懸浮細(xì)胞，可按照流式細(xì)胞術(shù)步驟操作后，將細(xì)胞懸液置于玻片上進行觀察；對于貼壁細(xì)胞，可在蓋玻片或培養(yǎng)室中培養(yǎng)和誘導(dǎo)凋亡后，加入工作液孵育，再進行觀察。

Annexin V-AbFluor™ 647 細(xì)胞凋亡/周期檢測試劑盒具有以下優(yōu)勢：

• 高靈敏度和特異性：能精確區(qū)分不同階段的凋亡細(xì)胞和死細(xì)胞，對早期凋亡細(xì)胞的檢測具有很高的靈敏度。

• 雙通道檢測：Annexin V-AbFluor™ 647 和 PI 的熒光發(fā)射波長不同，可實現(xiàn)雙通道檢測，提供更全面的細(xì)胞凋亡信息。

• 良好的兼容性：適配主流流式細(xì)胞儀及熒光顯微鏡平臺，方便不同實驗室根據(jù)現(xiàn)有設(shè)備選擇使用。