百歐博偉生物：在微生物檢測中，遇到異?，F象平板（如菌落過度蔓延、污染、菌落形態異?；蚺囵B基異常等）時，需采用特殊方法進行菌落計數。以下是具體處理步驟和注意事項：

一、確認異常現象類型

1、菌落過度蔓延

現象：菌落連成一片，無法區分單個菌落。

原因：菌種擴散性強（如變形桿菌）、培養基過濕、接種量過大。

2、菌落形態異常

現象：目標菌與非目標菌形態差異大（可能為污染）。

3、培養基異常

現象：培養基變色、渾濁、沉淀或干裂。

4、菌落密度異常

現象：菌落過密（>300 CFU/平板）或過疏（<10 CFU/平板）。

二、異常平板的處理與計數方法

1、菌落過度蔓延

分區計數法：

選擇蔓延區域邊緣的分散菌落進行計數，僅統計獨立菌落。

若蔓延區域占平板面積>50%，需報告為“蔓延菌落”（TMTC：Too Many To Count），并重新稀釋樣品。

表面滅菌法（特定菌種）：

覆蓋一層無菌瓊脂（45-50℃）固定菌落，冷卻后計數下層分散菌落。

2、疑似污染或菌落形態異常

選擇性培養基驗證：

將可疑菌落轉接到選擇性培養基（如EMB、SS瓊脂）確認是否為非目標菌。

染色鑒定：

使用革蘭染色、芽孢染色等輔助判斷，排除污染菌。

計數原則：

僅計數符合目標菌特征的菌落，其余標記為污染并記錄。

3、培養基異常

物理干擾（如沉淀）：

使用立體顯微鏡或傾斜平板觀察，排除沉淀干擾。

化學干擾（如顏色變化）：

通過空白對照比對，確認是否為菌落代謝產物導致的變色。

4、高密度或低密度菌落

高密度（>300 CFU）：

報告為“不可計數”，選擇更高稀釋度的平板重新計數。

低密度（<10 CFU）：

結合多個稀釋度計算加權平均值，或按檢測下限報告（如“<10 CFU/mL”）。

三、特殊情況處理

1、菌落重疊但可辨：

統計所有可見獨立菌落，相鄰菌落間距<2 mm時按1個計算。

2、鏈狀菌落：

視為單個菌落（除非明顯由多個菌體形成）。

3、微型菌落（<0.5 mm）：

使用立體顯微鏡（10-15倍放大）輔助計數。

四、記錄與報告

1、明確標注異常現象：

記錄平板狀態（如“蔓延生長”“疑似污染”）。

2、計算公式調整：

若僅部分稀釋度可用，需注明數據來源（如“基于10??稀釋度計數”）。

3、結果有效性說明：

異常平板數據需備注可能誤差，必要時重新實驗。

五、預防措施

優化稀釋度：對未知樣品進行梯度稀釋（建議3個連續稀釋度）。

控制接種量：確保每平板菌落數在30-300 CFU之間。

使用抑制擴散劑：添加TTC（氯化三苯基四氮唑）或0.1%脫氧膽酸鈉抑制蔓延。

嚴格無菌操作：避免污染導致的假陽性/陰性。

六、注意事項

若異常平板無法準確計數，需重新制備樣品并復測。

參考標準：遵循ISO 7218、FDA BAM或實驗室內部SOP要求。

通過以上方法，可在異常情況下限度保證菌落計數的科學性和準確性。

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