“癌癥”!這個詞似乎在日常生活中離我們非常遙遠,但我們又總能聽到身邊有人罹患癌癥的沉痛消息。據統計,2020年全球有近1000萬例(或近六分之一)的死亡由癌癥導致。現代人們許多不良的生活習慣(如:抽煙、飲酒)、果蔬攝入量低、過度肥胖等均是引發癌癥的關鍵因素。
作為癌癥亞型,惡性腫瘤同樣具有高致死率特征。現階段常規癌癥治療手段主要包括手術切除、化學療法與放射療法。然而,這些療法存在顯著毒副作用,包括腫瘤細胞多藥耐藥性、正常細胞毒性及免疫損傷等。因此,開發低毒副作用的新型抗癌藥物已成為當務之急。
近年來,天然產物因其相較于合成分子具有低毒副作用的潛在生物活性而備受關注。部分乳酸菌菌株所產胞外多糖(EPS)的抗腫瘤活性已獲研究證實。而多糖的抗腫瘤活性受其單糖組成、蛋白含量、分子量、糖苷鍵位置及取代基團等多重結構因素影響。
南昌大學陶雪瑩研究團隊2020年在《International Journal of Biological Macromolecules》發表了一篇題為“Characterization and antitumor activity of novel exopolysaccharide APSof Lactobacillus plantarum WLPL09 from human breast milk”的文章,文章報道了他們通過離子交換層析法從母乳源植物乳桿菌WLPL09中分離純化獲得兩種胞外多糖NPS與APS,然后對其進行了初步結構表征,并采用人肝癌HepG2細胞系、人結腸腺癌HCT-8細胞系及人結腸癌HT-29細胞系評估其體外抗腫瘤活性。
其中,研究團隊使用布魯克海文公司的BI-MwA、BI-RIVS和BI-DNDC對兩種多糖(APS和NPS)的均一性和重均分子量進行了分析測定。
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EPS的提取與純化:
1.1 菌株培養:植物乳桿菌WLP109在MRS培養基中37℃厭氧培養24 h。
1.2 EPS粗提:離心(9000×g,5 min)去除菌體,上清液用2倍體積冷乙醇沉淀48 h,再經Sevag法去除蛋白質,透析后凍干得粗EPS。
1.3 離子交換色譜純化:采用?KTA Prime Plus系統,HiTrap Q HP柱,依次用純水、0.9 M、1.1 M、1.5 M NaCl洗脫,收集APS(0.9 M NaCl洗脫組分)和NPS(水洗脫組分)。
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多糖均一性和分子量測定
研究團隊將多角度靜態光散射檢測器 (BI-MwA,美國布魯克海文儀器公司)與尺寸排阻色譜(SEC,美國安捷倫科技公司)、示差折光檢測器(DRI,美國布魯克海文儀器公司)聯用,構建了SEC-MALLS-RI系統用于多糖均一性和分子量的測定。流動相使用含0.02 g/L NaN3的0.1 M NaNO3溶液,折光指數增量(dn/dc)使用BI-DNDC(美國布魯克海文儀器公司)測量得到,dn/dc值為0.141 mL/g。EPS樣品(5.0 mg/mL)經0.22 μm濾膜(Millex HA)過濾。
BI-MwA檢測器可以與任何品牌的液相連用,同時也支持單機使用,可得到絕對重均分子量Mw、第二維里系數A2、Rg等重要參數。
多糖均一性和重均分子量測定:
如圖A、B所示,NPS和APS均呈現單一對稱峰,表明其為均一性多糖。經計算,NPS和APS的重均分子量(Mw)分別為72.60 kDa與33.22 kDa。
這項研究展示了SLS技術在天然活性物質研究中的強大能力。隨著技術的不斷發展,SLS必將在更多領域發揮重要作用,助力科學家揭開更多天然產物的活性奧秘。
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