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一、試劑盒概述

Annexin V-AbFluor™ 647 細(xì)胞凋亡/周期檢測(cè)試劑盒是一種用于高靈敏度檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的試劑盒。它通過(guò) Annexin V 與磷脂酰絲氨酸（PS）的特異性結(jié)合，結(jié)合碘化丙啶（PI）雙染技術(shù)，實(shí)現(xiàn)凋亡早晚期細(xì)胞及死細(xì)胞的精準(zhǔn)區(qū)分，適用于流式細(xì)胞術(shù)與熒光顯微鏡檢測(cè)。

二、工作原理

• 細(xì)胞凋亡過(guò)程中的 PS 外翻：在正常細(xì)胞中，PS 位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，細(xì)胞凋亡時(shí)，PS 會(huì)從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到外側(cè)，暴露于細(xì)胞外環(huán)境。

• Annexin V 與 PS 結(jié)合：Annexin V 是一種依賴 Ca2?的磷脂結(jié)合蛋白，對(duì) PS 具有高親和力。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡，PS 外翻至細(xì)胞膜外側(cè)時(shí)，Annexin V 可與其結(jié)合，從而識(shí)別凋亡細(xì)胞。

• PI 的染色作用：PI 是一種熒光核染料，不能穿透活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的完整細(xì)胞膜，但能透過(guò)晚期凋亡和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜，使細(xì)胞核染色。通過(guò) Annexin V 和 PI 的聯(lián)合染色，可以區(qū)分活細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡或壞死細(xì)胞。

三、試劑盒組分及作用

• Annexin V 結(jié)合緩沖液（5×）：用于稀釋和重懸細(xì)胞，為 Annexin V 與 PS 的結(jié)合提供適宜的環(huán)境，包括適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度和 pH 值等，其成分和配比能穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，減少非特異性結(jié)合。

• Annexin V-AbFluor™ 647：是 Annexin V 與 AbFluor™ 647 熒光染料的標(biāo)記物。AbFluor™ 647 染料具有優(yōu)異的熒光性能，其激發(fā)波長(zhǎng)為 650nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 665nm，相比其他類似染料，如 Alexa Fluor 647、Cy5、DyLight™ 649 等，具有更高的熒光強(qiáng)度和光穩(wěn)定性，能更清晰地標(biāo)記凋亡細(xì)胞。

• 碘化丙啶（PI）：PI 的激發(fā)波長(zhǎng)為 535nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 617nm。活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞膜完整，PI 無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此細(xì)胞核不被染色；而晚期凋亡和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜失去完整性，PI 可進(jìn)入細(xì)胞與 DNA 結(jié)合，使細(xì)胞核發(fā)出紅色熒光。

四、檢測(cè)方法及優(yōu)勢(shì)

• 流式細(xì)胞術(shù)：可快速定量分析大量細(xì)胞的凋亡情況。通過(guò)設(shè)置不同對(duì)照樣品，如陰性對(duì)照細(xì)胞（不加染料）、單染 Annexin V-AbFluor™ 647 細(xì)胞、單染 PI 細(xì)胞，調(diào)整電壓和光補(bǔ)償后，能準(zhǔn)確區(qū)分四類細(xì)胞：活細(xì)胞（Annexin V-/PI-）、早期凋亡細(xì)胞（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡細(xì)胞（Annexin V+/PI+）和壞死細(xì)胞（Annexin V-/PI+）。

• 熒光顯微鏡檢測(cè)：適用于觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化和單個(gè)細(xì)胞的凋亡情況。對(duì)于懸浮細(xì)胞，可按照流式細(xì)胞術(shù)步驟操作后，將細(xì)胞懸液置于玻片上進(jìn)行觀察；對(duì)于貼壁細(xì)胞，可在蓋玻片或培養(yǎng)室中培養(yǎng)和誘導(dǎo)凋亡后，加入工作液孵育，再進(jìn)行觀察。

Annexin V-AbFluor™ 647 細(xì)胞凋亡/周期檢測(cè)試劑盒具有以下優(yōu)勢(shì)：

• 高靈敏度和特異性：能精確區(qū)分不同階段的凋亡細(xì)胞和死細(xì)胞，對(duì)早期凋亡細(xì)胞的檢測(cè)具有很高的靈敏度。

• 雙通道檢測(cè)：Annexin V-AbFluor™ 647 和 PI 的熒光發(fā)射波長(zhǎng)不同，可實(shí)現(xiàn)雙通道檢測(cè)，提供更全面的細(xì)胞凋亡信息。

• 良好的兼容性：適配主流流式細(xì)胞儀及熒光顯微鏡平臺(tái)，方便不同實(shí)驗(yàn)室根據(jù)現(xiàn)有設(shè)備選擇使用。