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亞科因(武漢)生物技術(shù)有...

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CheKine™ α- 葡萄糖苷酶活性檢測(cè)試劑盒(微量法)

閱讀:166      發(fā)布時(shí)間:2025-5-16
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一、試劑盒概述

CheKine™ α- 葡萄糖苷酶活性檢測(cè)試劑盒(微量法)是一種用于檢測(cè)樣本中 α- 葡萄糖苷酶(α-GC)活性的工具。α-GC 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化水解芳基或烴基與糖基之間的 α- 糖苷鍵生成葡萄糖,不僅與細(xì)胞壁的松弛或加固有關(guān),而且與細(xì)胞識(shí)別和一些信號(hào)分子產(chǎn)生密切相關(guān)。該試劑盒采用微量法,具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高和特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),適用于多種生物樣本的檢測(cè)。

二、檢測(cè)原理

α-GC 催化水解對(duì)硝基苯 - α-D- 吡喃葡萄糖苷(pNPG)生成對(duì)硝基苯酚(pNP)和葡萄糖。對(duì)硝基苯酚在 400 nm 處有最大吸收峰,通過(guò)測(cè)定該波長(zhǎng)處吸光度的變化,可反映 α-GC 的活性。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

(一)樣本準(zhǔn)備

  1. 組織樣本 :準(zhǔn)確稱取適量組織,用預(yù)冷的生理鹽水洗滌,去除血液和雜質(zhì),按質(zhì)量體積比加入組織裂解液,冰上充分勻漿,離心取上清液備用。

  2. 細(xì)胞樣本 :收集細(xì)胞,用生理鹽水洗滌,加入細(xì)胞裂解液,吹打混勻,冰上裂解,離心取上清液。

  3. 血漿 / 血清樣本 :采集血液樣本,靜置凝固后離心取上清液(血清);或采集血液后立即加入抗凝劑,混勻后離心取上清液(血漿)。

(二)試劑準(zhǔn)備

  1. 試劑配制 :按照試劑盒說(shuō)明書的要求,配制相應(yīng)的試劑,如反應(yīng)緩沖液、底物溶液(pNPG)等。

  2. 試劑預(yù)冷 :將配制好的試劑置于冰上預(yù)冷,以減少反應(yīng)過(guò)程中的非特異性誤差。

(三)反應(yīng)體系設(shè)置

  1. 反應(yīng)體系組成 :在微量反應(yīng)板或適當(dāng)容器中,依次加入樣本、反應(yīng)緩沖液和底物溶液,輕輕混勻。

  2. 反應(yīng)條件 :將反應(yīng)體系置于合適溫度(一般為 37℃)下孵育一定時(shí)間,使反應(yīng)充分進(jìn)行。

(四)檢測(cè)

  1. 吸光度檢測(cè) :使用酶標(biāo)儀或分光光度計(jì),在 400 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定反應(yīng)體系的吸光度值。

  2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 :使用試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品,按照說(shuō)明書的要求進(jìn)行稀釋和檢測(cè),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果解讀

  1. 酶活性計(jì)算 :根據(jù)測(cè)得的吸光度值和標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)合公式,計(jì)算樣本中 α-GC 的活性。

  2. 結(jié)果分析 :α-GC 活性的變化可反映機(jī)體的糖代謝狀態(tài)和細(xì)胞識(shí)別能力。例如,在糖尿病等代謝疾病中,α-GC 活性可能出現(xiàn)異常;在某些植物生理過(guò)程中,α-GC 活性也可能受到影響。

  3. 注意事項(xiàng) :實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需嚴(yán)格控制反應(yīng)條件,避免樣本之間的交叉污染。同時(shí),應(yīng)設(shè)置適當(dāng)?shù)膶?duì)照組,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

五、應(yīng)用領(lǐng)域

CheKine™ α- 葡萄糖苷酶活性檢測(cè)試劑盒(微量法)具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高和特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),適用于以下領(lǐng)域:

  1. 代謝研究 :用于研究糖代謝過(guò)程和細(xì)胞識(shí)別機(jī)制。

  2. 疾病診斷 :輔助診斷與糖代謝異常相關(guān)的疾病,如糖尿病等。

  3. 藥物篩選 :評(píng)估藥物對(duì) α-GC 活性的影響,篩選潛在的代謝調(diào)節(jié)藥物。

  4. 植物生理研究 :研究植物在不同生理狀態(tài)下的糖代謝變化。



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