甘油三酯（ TG） 含量檢測(cè)試劑盒

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

試劑內(nèi)容：

可見(jiàn)分光光度法

試劑一：自備，取 100 mL 玻璃空瓶，加入 45mL 正庚烷，45mL 異丙醇，蓋緊后混勻，4℃保存。

試劑二：液體 7mL×1 瓶，4℃保存。試劑三：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑五：液體 30mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑六：液體 30mL×1 瓶，4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 瓶，臨用前加 5mL 試劑一，即 1mg/mL 甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：

TG 是長(zhǎng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細(xì)胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。 測(cè)定原理： 用異丙醇抽提取 TG，KOH 皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸，過(guò)碘酸氧化甘油生成甲醛， 在氯離子存在下甲醛與乙酰丙酮縮合生成黃色物質(zhì)，在 420 nm 有特征吸收峰，其顏色的深淺與 TG 含量成正比。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿、雙蒸水和 100mL 玻璃空瓶。

操作步驟:

一、TG 的提取：

1、 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清待測(cè)。

2、 細(xì)胞、細(xì)菌：先收集 400-500 萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加 1mL 試劑一，超聲波破碎

1min（強(qiáng)度 20％，超聲 2s，停 1s），8000g， 4℃離心 10min，取上清待測(cè)。

3、 血清（漿）等液體樣品：直接測(cè)定。二、測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 420 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 水浴鍋預(yù)熱到 65℃。

加試劑一后充分混勻，再加試劑二，劇烈振蕩 30s，靜置，待分層后取上層溶液 75µL，置于新的 EP 管中。

3. 甘油三酯含量測(cè)定：

取出 EP 管，待冷卻后，于 420nm  處比色，記為 A 空，A 標(biāo)和 A 測(cè)。注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

三、計(jì)算公式：

1. 血清（漿）中甘油三酯含量：

TG 含量（mg/dL）=C  標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）×100

=100×（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）

C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1mg/mL；100：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1dL=100 mL。

2. 組織中甘油三酯含量：

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

TG 含量（mg/mg prot）= C 標(biāo)準(zhǔn)品×V×（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷（Cpr ×V）

=（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷ Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

TG 含量（mg/g 鮮重）=C  標(biāo)準(zhǔn)品×V×（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷W

=（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷ W

C 標(biāo)準(zhǔn)品：1mg/mL ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g ;V：加入試劑一的體積， 1mL。

3. 細(xì)胞、細(xì)菌中甘油三酯含量：

TG 含量（mg/104 cell）=C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷細(xì)菌或細(xì)胞密度

=（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷細(xì)菌或細(xì)胞密度

C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1mg/mL；細(xì)菌或細(xì)胞密度：104 cell/mL

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開(kāi)后應(yīng)該及時(shí)蓋緊。

2. 加試劑二后需劇烈震蕩，使待測(cè)液中甘油三酯得到充分提取。

3. 檢出限為 100µ mol/L。

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注意事項(xiàng)

1、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套及口罩操作；

2、為保持本產(chǎn)品的優(yōu)良使用效果，請(qǐng)務(wù)必按照建議的儲(chǔ)存條件進(jìn)行保存；

3、本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。

甘油三酯（ TG） 含量檢測(cè)試劑盒