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細胞復蘇的步驟及注意事項

閱讀:1028        發布時間:2022-12-22
  細胞復蘇,生物學的一種術語,是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細胞解凍之后重新培養,細胞恢復生長的過程。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。
  細胞復蘇的步驟:
  ①將冷凍管從液氮中取出,迅速投入37℃水浴融化,細胞融化后要盡快(約1min)移出37℃水浴。37℃水浴時間延長會提高細胞死亡率,復蘇過程中一般細胞死亡率在20%~25%之間。
  ②迅速用酒精棉球擦拭冷凍管外部殺菌消毒,然后放置在冰浴上。
  ③小心開啟瓶蓋,把細胞轉入含有4mL培養基的培養瓶中,然后把培養瓶移至培養箱,26℃~28℃培養1h,讓細胞貼壁。
  ④細胞貼壁后,小心移棄培養基,主要是去掉DMSO(懸浮生長細胞要通過離心沉淀除去DMSO)、死細胞及其碎片,加5mL新鮮培養基,26℃~28℃培養。
  ⑤細胞培養24h后,更換新鮮培養基,繼續培養直到形成單層,便可以傳代。
  ⑥詳細記錄復蘇細胞的名稱、數量、復蘇時間、存放部位等。
  細胞復蘇的注意事項:
  1、注意無菌操作。
  2、應在1-2min內使凍存液融化。如果復溫速度太慢,則會造成細胞損傷。另外,細胞復蘇后的操作-好在4℃冰浴中進行,以減少冷凍保護劑對細胞的毒性。
  3、細胞復蘇過程中,升溫的速率要大,把從液氮或-70℃冰箱中取出的細胞在短的時間內放入水浴鍋。
  4、細胞放入水浴中注意用鑷子夾住細胞凍存管并在水浴中不時晃動,使其受熱均勻,并防止水浴時水進入細胞凍存管污染細胞。打開細胞凍存管之前要用酒精棉球將凍存管消毒并晾干。
  5、液氮操作有一定的危險性,打開液氮罐取出細胞時,戴上防護眼鏡。
  6、如果凍存管密封不嚴,液氮可被吸入。由于解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,將可能發生爆炸。復蘇過程中應蓋上恒溫水浴鍋的蓋。

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