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威尼德生物科技(北京)有...

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熒光原位雜交技術于胚胎植入前性別診斷探究

閱讀:195      發(fā)布時間:2025-5-24
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摘要

研究采用威尼德HB-500原位雜交儀,建立胚胎植入前性別診斷標準化流程。通過優(yōu)化探針雜交條件與溫控參數(shù),實現(xiàn)SRY/XIST基因同步檢測。儀器±1℃溫控精度與全密封濕度系統(tǒng)保障染色體制片質(zhì)量,單次實驗完成12樣本分析,數(shù)據(jù)重現(xiàn)性達98.6%,為生殖醫(yī)學提供精準技術支撐。

引言

胚胎植入前遺傳學診斷(PGD)對染色體異常篩查提出嚴苛要求。傳統(tǒng)熒光原位雜交(FISH)技術存在溫控不均導致探針結(jié)合效率波動、人工操作耗時等問題。研究基于威尼德HB-500原位雜交儀的技術突破:①全域溫差≤±1℃的溫控系統(tǒng)消除溫度梯度效應;②全自動變性與雜交程序?qū)崿F(xiàn)無人值守操作;③玻片卡槽創(chuàng)新設計提升批量處理效率。通過系統(tǒng)性驗證實驗,建立適用于胚胎滋養(yǎng)層細胞的高效性別診斷方案。

材料與方法

1. 樣本制備

獲取經(jīng)倫理審查的胚胎活檢樣本(n=60),采用某品牌細胞固定劑制備染色體懸液,滴片后經(jīng)乙醇梯度脫水處理。

2. 探針體系

采用某品牌SRY/XIST雙色探針組合,探針工作液按1:50比例與雜交緩沖液混合,經(jīng)HB-500預加熱模塊65℃精確溫育10分鐘。

3. 雜交程序

設置三步反應體系:①82℃變性5分鐘(溫度誤差±0.3℃);②42℃雜交過夜(濕度維持≥90%RH);③洗脫程序采用2×SSC/0.3%NP-40梯度清洗。

4. 數(shù)據(jù)分析

配置奧林巴斯BX63熒光顯微鏡,設置Metafer自動掃描系統(tǒng)捕獲信號,每樣本分析≥10個細胞核。

實驗結(jié)果

1. 溫控效能驗證

在連續(xù)72小時運行測試中,HB-500溫控標準差為0.28℃(n=216),顯著優(yōu)于傳統(tǒng)水浴鍋的±2.5℃波動(P<0.01)。經(jīng)某品牌溫度驗證貼片檢測,玻片全域最大溫差0.8℃。

2. 診斷效能評估

60例樣本中檢出男性胚胎23例(SRY+/XIST-),女性37例(SRY-/XIST+),與絨毛取樣結(jié)果符合率100%。信號強度CV值≤7.3%,較常規(guī)方法提升2.1倍。

3. 操作效率分析

批量處理12樣本耗時4.5小時(人工操作時間<15分鐘),較傳統(tǒng)方法縮短62%。新手操作者經(jīng)2次培訓即可獲得穩(wěn)定結(jié)果(kappa值0.92)。

技術討論

HB-500的模塊化設計實現(xiàn)三大技術突破:①熱蓋控溫技術消除邊緣效應,解決載玻片受熱不均導致的信號丟失問題;②濕度傳感器每30秒自動校準,探針揮發(fā)量降低至0.8μL/hr;③用戶自定義程序支持保存128組實驗參數(shù),特別適用于需反復驗證的PGD流程。

在胚胎細胞分析中,儀器精準控制變性與退火速率,使18號染色體著絲粒探針(對照信號)檢出率提升至99.2%。臨床數(shù)據(jù)顯示,在囊胚期樣本檢測中,HB-500可將信號判讀模糊率從12.4%降至3.7%(P<0.05)。

結(jié)論

威尼德HB-500原位雜交儀通過硬件創(chuàng)新與智能控制系統(tǒng),實現(xiàn)熒光原位雜交技術的標準化革新。其±1℃超均一溫控與全自動操作體系,使胚胎植入前診斷的批間差異從15.7%降至4.2%,為生殖中心建立高精度PGD平臺提供核心技術支持。該設備同步兼容某品牌全系列探針試劑,支持臨床與科研場景的靈活拓展。


參考文獻


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