一、用途
用于將DNA(質粒、siRNA、miRNA等)高效轉染至貼壁或懸浮培養的哺乳動物細胞中。
二、操作流程(簡化版)
詳細版見《polyplus轉染試劑jetOPTIMUS®產品說明書》
A. 試劑準備
使用前將jetPRIME® 室溫平衡15分鐘,輕柔混勻。
用無菌緩沖液(如150mM NaCl)稀釋DNA。
B. 混合
按比例混合稀釋的DNA與jetPRIME®(例如:1µg DNA : 2µL 試劑)。
渦旋振蕩10秒,室溫靜置10分鐘形成轉染復合物。
C. 轉染
將復合物逐滴加入細胞培養基中,輕柔搖晃培養皿混勻。
37°C孵育4-24小時后更換新鮮培養基(視細胞類型而定)。
三、推薦比例(參考)
細胞類型 | DNA(µg) : jetPRIME®(µL) |
標準貼壁細胞(如HEK293) | 1 : 2 |
難轉染細胞 | 1 : 3–4 |
四、注意事項
細胞密度:轉染時細胞應達60-80%匯合度。
血清兼容性:可直接加入含血清的培養基中。
保存條件:4°C儲存(勿冷凍),避免光照。
安全性:操作時戴手套,在生物安全柜中進行。
五、提高敏感細胞細胞活力的提示
(1)轉染后4小時更換培養基。
(2)將DNA量減少到0.5倍,同時保持之前使用的DNA/jetOPTIMUS®比例。
(3)在較早的時間點(例如轉染后24小時而不是48小時)分析轉染。
(4)在敏感細胞的還原血清培養基中進行轉染。
(5)檢查靶基因是否影響細胞活力。
(6)確保細胞在轉染前已傳代兩次以上且少于20次。
(7)丟棄過度培養的細胞。
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