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小鼠心肌細胞傳代、凍存、復蘇說明

時間:2023-1-24 閱讀:351
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  小鼠心肌細胞傳代、凍存、復蘇說明
  小鼠心肌細胞傳代:
  1)細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
  3)棄上清,沉淀細胞用12ml完全培養基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
  小鼠心肌細胞凍存:
  1)細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
  3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
  4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
  4、細胞復蘇:
  1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
  2)將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
  3)棄上清,沉淀用5ml完全培養基重懸,接種25cm2培養瓶,于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。

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