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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 從臍靜脈分離干細胞

時間:2021-10-28 閱讀:216
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PriCells: 從臍靜脈分離干細胞                                                                                  


試劑和材料:
1. 培養基:*LG-DMEM:含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM,添加10%熱滅活胎牛血清,100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素;
2. PBSA;
3. 胰蛋白酶,0.05%,含EDTA;
4. 膠原酶A,0.1%用PBSA配制;
5. 培養瓶;
6. 導管;


實驗方法:
1. 在正常分娩后6-12h內收集和處理臍帶;
2. 在臍靜脈內插入導管,用PBSA*地洗2次;
3. 夾住遠端臍帶;
4. 用0.1%膠原酶溶液充滿靜脈;
5. 夾住近端臍帶;
6. 將臍帶在37℃孵育20min;
7. 輕輕按摩臍帶,收集含有內皮和內皮下層細胞的懸浮液,600g離心10min;
8. 用培養基重懸細胞;
9. 計數后,按1×103個細胞/cm2的密度將細胞接種到75cm2的培養瓶中;
10. 3天后更換培養基,除去未貼壁細胞,保留貼壁的細胞繼續生長,每3天更換一次新鮮培養基,至大約2周后可見成纖維樣細胞生長;
11. 在這種情況下,用0.25%胰蛋白酶/EDTA收集細胞,傳代到新培養瓶中繼續擴增;

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