PriCells: 動物小血管內皮細胞的分離

實驗材料：

1. 兔、狗或大鼠等動物

2. 1×PBS，含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml，pH7.4

3. 0.2%Ⅰ型膠原酶

4. 眼科剪，眼科鑷

5. 慕絲線（7號線）、細鐵絲

6. 離心管（15ml、50ml）

實驗方法：

1. 處死動物后，局部消毒取出主動脈，用加入抗菌素的PBS沖洗，放入盛有PBS的平皿中，摘除血管外的脂肪和結締組織。

2. 用細絲線結扎血管的一端，用鑷子輕輕夾住結扎側的末端，用一鐵絲將扎住的末端捅進血管內，將血管翻轉過來，使內皮細胞面向外。血管另一側的末端也塞進血管內，用細絲線結扎住，使整個血管僅內皮細胞暴露在外面。

3. 把血管放至盛有5mol 0.2%膠原酶的平皿中，置于37℃ CO2孵箱中消化10-15min，多次搖動平皿，以便內皮細胞脫落。消化近結束時，在倒置顯微鏡下觀察，若大部分內皮細胞已脫落，加少量培養液終止消化。

4. 將消化液收集到離心管中，1000r/min離心5min。加入培養基重懸制成細胞懸液，放入T25的細胞培養瓶中，置于37℃，含5%CO2的孵箱中培養。2天換液1次。

5. PriCells-原代內皮細胞特制基礎培養基

6. PriCells-原代內皮細胞培養特制添加劑

7. PriCells-原代細胞分離試劑盒

8. PriCells-原代細胞鑒定試劑盒