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相對分子質量校正曲線標準品可通過體積排阻色譜法,繪制小分子蛋白或者多肽類樣品的(如膠原蛋白肽,低聚肽粉,膠原三肽)相對分子質量校正曲線。通過這個方法,可以建立一種能有效測定多肽相對分子質量的方法。相對分子質量校正曲線標準品一般包括五種物質,分別是:甘氨*-甘氨*-甘氨*標準品,相對分子質量189;甘氨*-甘氨*-酪氨*-精氨*標準品,相對分子質量451;桿菌酶標準品,相對分子質量1411;抑肽*標準品,相對分子質量6511;細胞色素*標準品,相對分子質量12311。
測定相對分子質量的方法有多種,如超濾法、凝膠電泳法、體積排阻色譜法、質譜法等。其中超濾法只能較為粗略地測定相對分子質量分布,在分離純化部分應用較多;凝膠電泳法存在操作繁瑣、重現性差的缺點,且對小肽的相對分子質量測定有很大的局限性,適用于蛋白質、多肽相對子質量分布研究的初期階段;質譜法能較為精確地測定分子質量分布,但設備昂貴,不宜做常規分析手段;體積排阻色譜法具有操作簡便快速、重復性好、精確度高的特點,已廣泛應用于多肽、蛋白等大分子物質的相對分子質量及其分布的測定。
體積排阻色譜法是利用凝膠把分子大小不同的物質分離開的一種方法。凝膠是一種具有立體網狀結構且呈多孔的不溶性珠狀顆粒物質,對于某種型號的凝膠,一些大分子不能進入凝膠顆粒內部而被排阻在外,只能沿著顆粒間的縫隙流出柱外;而一些小分子不被排阻,可自由擴散,滲透進入凝膠內部的篩孔,然后又被流出的洗脫液帶走。分子越小,進入凝膠內部越深,所走的路程越多,故小分子最后流出柱外,而大分子先從柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子與小分子之間,只能進入一部分凝膠較大的孔隙,亦即部分排阻,因此這些分子從柱中流出的順序也介于大、小分子之間。因此,樣品經過凝膠層析后,分子便按照從大到小的順序依次流出,達到分離的目的。
相對分子質量校正曲線標準品在國標中也有廣泛應用,
比如:GB 31645-2018 膠原蛋白肽
GB/T 22729-2008 海洋魚低聚肽粉
QB/T 4707-2014 玉米低聚肽粉
QB/T 5298-2018 小麥低聚肽粉
T/SNHFA 013-2021 海參低聚肽粉
綜上,相對分子質量校正曲線標準品可以簡便快速的測定多肽、蛋白等大分子物質的相對分子質量及其分布。
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