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詳細介紹
基于康寧基質膠的生物3D打印機
概述
康寧基質基質是一種富含細胞外基質®蛋白的水凝膠。它提取自 Engelbreth-Holm-Swarm （EHS） 小鼠肉瘤，其由層粘連蛋白、IV 膠原、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、內肌動蛋白/尼多原、TGF-?、表皮生長因子、胰島素樣生長因子、成纖維細胞生長因子、組織纖溶酶原激活劑和其他生長因子組成。該協議將引導您完成使用康寧基質膠進行3D生物打印的分步過程。
這種水凝膠已成功用于多種 3D 培養和組織工程應用。現在，它還可以在 平臺上用于 3D 生物打印具有多種細胞系的癌癥球體。將 Matrigel 基質與 3D 生物打印機相結合，可以以標準化和可重復的方式實現球狀體和類器官的自動化生成。
儲存和處理
康寧基質基質應儲存在 -20°C 下。該協議已針對#354234高濃度基質膠進行了優化。其他 Matrigel 變體可能需要更新打印參數。
材料
康寧 Matrigel 基底膜基質 （HC， #354234）， 10 mL 樣品瓶
1 x 15 mL Falcon® 離心管
1 x 5 mL 注射器
1 x 注射器蓋
1 x 全金屬 250 μm 噴嘴
1 x Costar® 多孔板或 Falcon® 培養皿
冰桶
細胞
細胞培養基
孵化器
方法
從-20°C中取出康寧基質基質，并在4°C的冰桶中解凍過夜;
在 15 mL Falcon® 離心管中，制備含有實驗所需適當細胞數的細胞沉淀;
注：我們建議使用 2 萬/mL 細胞濃度，并制備總共 5 mL 的細胞負載生物墨水。在這種情況下，您需要制備一個包含 3 萬個細胞的細胞沉淀。
將打印頭冷卻至4°C;
將 打印床加熱至 37°C，然后插入您選擇的培養皿（蓋上蓋子），使其達到設定溫度;
使用移液管，向細胞沉淀中加入 3 mL（或所需體積）的 Matrigel®，并上下充分混合以確保細胞均勻性;
注意： 使用冰桶內的管子執行此步驟，以防止過早交聯。
從 5 mL 注射器中取出柱塞，并將注射器蓋放在魯爾鎖上;
將冷藏的康寧Matrigel基質細胞溶液移液到注射器筒中，注射器蓋朝下;
從注射器柱塞上取下黑色橡膠塞，將其放入注射器筒的開口中;
將注射器桶翻轉為面朝上，確保橡膠塞不會因固定到位而脫落;
等待物料流到底部，接觸橡膠塞;
取下注射器蓋;
用柱塞將材料向上推，直到它在魯爾鎖針頭上形成彎月面;
注意： 執行此步驟時，請防止柱塞重新連接到塞子上。
如果注射器中有氣泡，請敲擊槍管以確保滯留的空氣流向表面;
將250μm全金屬噴嘴連接到注射器上;
將注射器放入生物打印頭中，確保盡量減少Matrigel®暴露于室溫，以避免過早交聯;
從下面的“打印設置"部分插入推薦的打印參數以打印您的類器官;
注意：要操作液滴分辨率（直徑和體積），請查看 Printing Dots 協議;
注意：由于表面受熱，Matrigel 液滴在打印過程中會部分交聯，但是，請確保不要讓它們在表面上停留超過 15 分鐘。15分鐘后，液滴將開始變干，從而導致細胞活力降低。
將Matrigel基質液滴板放入培養箱（37°C，95%相對濕度，5%CO2） 30 分鐘;
添加適量的培養基進行培養。
注意：為了獲得佳打印效果，建議不要進一步稀釋基質。如果您希望將更大體積的細胞與 ECM 混合，則提供 Cell-Bioink 混合方案。它包含有關如何通過用載細胞培養基稀釋來混合和制備載細胞的生物墨水的說明。
注意： 查看我們的檢測方案，進一步分析球狀體功能。
打印設置
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