植物ATP酶(ATPase)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)

　　BS-7929  植物ATP酶(ATPase)ELISA試劑盒

　　以下是植物ATP酶(ATPase)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)綜合指南：

　　一、檢測(cè)原理

　　采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：

　　微孔板預(yù)包被ATP酶抗體，依次加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體

　　經(jīng)溫育洗滌后，TMB底物在過(guò)氧化物酶催化下顯色(藍(lán)→黃)，顏色深度與ATP酶濃度正相關(guān)

　　用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，計(jì)算樣品活性或濃度

　　二、樣本處理要求

　　樣本類(lèi)型 處理方法

　　血清/血漿 采集后1000×g離心15-20分鐘，避免使用含NaN3的抗凝劑(抑制HRP活性)

　　植物組織 勻漿后1000×g離心20分鐘取上清，分裝凍存于-20℃(避免反復(fù)凍融)

　　細(xì)胞上清液 1000×g離心10分鐘去除顆粒

　　三、關(guān)鍵操作步驟

　　試劑準(zhǔn)備?：

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品需用稀釋液復(fù)溶

　　洗滌液按1:25用蒸餾水稀釋

　　加樣順序?：

　　空白孔→標(biāo)準(zhǔn)品孔→樣本孔

　　每孔依次加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品→檢測(cè)抗體→酶結(jié)合物

　　溫育條件?：

　　37℃避光反應(yīng)30分鐘，嚴(yán)格計(jì)時(shí)

　　終止反應(yīng)?：

　　加入終止液(2N H?SO?)后立即測(cè)定

　　四、注意事項(xiàng)

　　避免底物TMB接觸金屬器械，使用塑料吸頭加樣

　　不同批號(hào)試劑不可混用，未用完板條需密封防潮

　　顯色后若孔內(nèi)出現(xiàn)沉淀，需重新離心后測(cè)定

　　實(shí)驗(yàn)需設(shè)置復(fù)孔，CV值應(yīng)<15%

　　五、存儲(chǔ)與有效期

　　未開(kāi)封試劑盒：2-8℃保存(部分組分需-20℃)

　　有效期通常為6個(gè)月，復(fù)溶后標(biāo)準(zhǔn)品不可重復(fù)使用

　　注：本試劑盒僅限科研使用，不可用于臨床診斷。具體操作參數(shù)請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

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