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隨著NK細胞治療熱度的持續攀升,其合規生產也越來越受重視,本文重點講述了幾個不同來源NK細胞的工藝開發案例和未來展望:
一、PB-NK/外周血NK:
*滋養細胞共培養
收集健康供體單采血,并從中分離外周血單個核細胞,再用VarioMACS設備去除T細胞后,將其轉移到A-350N透氣袋中與輻照后的自體PBMC共培養,添加OKT3和IL-2,經14天培養,可以獲得高純度的NK細胞(>98%,CD3?CD16+CD56+),且擴增倍數可達520-860。
*無滋養細胞
此外,也有研究開發了無滋養細胞,符合GMP的NK細胞規模化生產工藝。取代滋養細胞的是可以表達IL-21和41BB配體的膜顆粒。
首先用CliniMACS Prodigy系統去除CD3+T細胞,并通過膜顆粒刺激NK細胞并在Prodigy中初步擴增;然后轉移到Xuri波浪生物反應器中通過灌流培養進行規模擴增。
最后,NK細胞通過LOVO設備進行清洗收獲,并使用CBS 2101降溫儀進行低溫保存。該工藝在不到2周的時間內可以使PB-NK細胞擴增1000倍,而且NK細胞在該平臺培養40多天之后,可以實現高達10^8倍的擴增效果,同時保持細胞毒性潛能。
