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LabChip GXII Touch-貫穿蛋白研發流程的快速分析

2023-10-18  閱讀(169)

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LabChip GXII Touch為生物治療藥物流程各個環節提供快速定量和樣品質控。例如,自動化的表征檢測使用戶可以更快地獲得多個關鍵的質量屬性。如今, 研究者們可在研發流程的更早期篩選出具備最佳指征的蛋白,并將“質量源于設計"的理念整合到生物治療藥物開發流程中(圖 5)。

小規模高通量工藝開發

工藝參數

純化和樣品制備



JANUS BioTx Pro

工作站

關鍵質量屬性的測定



信息學

工藝結果

圖 5. 利用 LabChip 微流體技術和 JANUS@Bio TX工作站, 您可以一天內完成使用其他方法通常需要幾周才能完成的樣品純化和分析。探索更廣泛的實驗條件,節約您的生物治療藥物研發時間和成本(如上圖)。LabChip Touch 試劑可用千多種蛋白屬性分析,包括標準和皮克級的蛋白質(圖 6)。



圖 6. 標準和皮克級靈敏度的蛋白質檢測實驗

LaChip GXII Touch在 AAV衣殼蛋白分析中,提高了AAV純度分析的速度、通量和數據質量。 AAV衣殼由三種病毒蛋白(VP1、VP2 和 VP3)組成,其比例、鑒別、純度影響藥物效能和效價強度,需要被鑒定并監控以確保藥物質量。利用 SDS存在下的微流控毛細管電泳技術分離 AAV衣殼蛋白,并測定每種病毒衣殼蛋白的大小和濃度。LabChip® GXII TouchTM 系統的ProteinEXactTM 試劑采用系統校準步驟,可實現高精度重現性,并具有更高的靈敏度和較寬的分析范圍。65秒內即可完成樣品分析。這種高通量的分析方法可以同時測定 96份 AAV樣品,并提供傳統毛細管電泳可比結果(圖 7)。



圖 7. AAV8 變性后衣殼蛋白Labchip電泳圖祥品重現性好

AAV動力學觀察實驗的應用:LabChipTM GXII TouchTM 蛋白鑒定系統能夠在 30-50秒內收集多達 300個實驗點,這可能為衣殼蛋白提供額外的信息。部分變性衣殼可由不同蛋白質分子量(單體、二聚體、三聚體等)的混合物組成,如圖 8所示。在實驗期間。在1%SDS 和 TE緩沖液中加入 AAV樣品的 96孔板被加熱到特定的溫度進行變性,隨后進行檢測。



圖 8A和 8B:動力學實驗中部分變性的 AAV8 (圖 8B—只顯示二聚體)

LabChip® GXII TouchTM 蛋白分析系統平臺提供 AAV 衣殼蛋白的全面分析的能力。該方法為 AAV衣殼蛋白鑒定提供了一種決速、高通量、穩定可靠的方法。高重現性和準確的衣殼成分檢測可以作為重組 AAV病毒顆粒表征的新方法,是基因治療應用的關鍵一步。

LabChip® GXII Touch 抗體表征應用

圖 9 展示了濃度為 1mg/mL的非還原MAb的電泳圖譜示例。左側插圖可見低含量片段,例如輕鏈、重鏈、重-輕鏈、重-重鏈、重-重-輕鏈和完整 MAb均實現良好分離。還原 MAb的電泳圖譜如圖 10所示,圖中可見非糖基化重鏈(NGHC)與重鏈之間具有足夠的分辨率,可進行準確定量。




圖 9. 非還原MAb電泳圖,顯示有片段和完整MAb的%純度。位于大約 17.5 秒處標記為 X 的峰是加入抗體中用作內標物的溶菌酶。LM是內標,Xsys是系峰。



圖 10. 還原 MAb 電泳圖譜

工作原理

LabChip電泳在小型微流體芯片上進行。分析之前, 將試劑裝載到芯片的各個孔中。這些孔與蝕刻有微小通道的石英片基相連, 每個微通道僅有人的發絲 粗細(圖 11)。

將芯片裝入 LabChip GXII Touch 系統后, 芯片孔與鉑 電極接觸, 由鉑電極提供電壓和電流控制。系統機 楲臂將微孔板上的樣品孔直接移動到芯片毛細管 “吸管"下方, 大約 150nL 樣品被抽吸到芯片上。 樣品染色和脫色由系統平臺自動完成。

待分析樣品逐一被電泳分離, 然后通過激光誘導的 熒光檢測樣品條帶。通過 ladder 和內標確定各條帶 的大小和濃度。在各樣品分析之間清洗吸管, 從而 消除了交叉污染或殘留。



圖 11. 蛋白質研究用的 LabChip


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