CUT&RUN技術提供了一種檢測細胞中蛋白-DNA相互作用的快速、可靠且真正的低細胞數測定法。與ChIP實驗不同,CUT&RUN不存在甲醛交聯、染色質碎裂和免疫沉淀,使之成為一種使蛋白-DNA相互作用富集和檢測靶基因的更快且更有效的方法。
CUT&RUN可在一天之內完成從活細胞到純化DNA的過程,且經證明每次檢測只需使用少至500-1000個細胞。和ChIP中碎裂所有細胞染色質不同,CUT&RUN利用一種染色質抗體靶向消化方法,從而使背景信號比ChIP實驗低得多。
因此CUT&RUN僅需ChIP-seq檢測所需測序深度的1/10.zui后,加入簡單的Spike-in DNA即可準確定量和標準化靶標蛋白結合,而這是ChIP方法無法實現的,這種方法可有效標準化樣品間和實驗間的信號。
艾美捷 EpiGentek EpiNext CUT&RUN快速套件,以優惠價格從低輸入提供無超聲破碎,以可靠地識別真正的目標蛋白質富集區域并實現高分辨率定位。可滿足用戶快速富集蛋白質結合的DNA并繪制全基因組蛋白質/DNA相互作用的圖譜的需求。
EpiNext CUT&RUN快速套件用于快速富集特定DNA,并與來自低輸入細胞/染色質的蛋白質(組蛋白或轉錄因子),并在體內識別或定位使用Illumina平臺或其他方法通過下一代測序進行蛋白質-DNA相互作用,如作為qPCR。創新的工作原理、優化的協議和套件組件允許以zui小化的非特異性背景水平捕獲目標蛋白質/DNA復合物。這個捕獲的DNA特別適合于構建非條形碼(單復合)和條形碼(多路復用)文庫以較少的偏差和較高的速度映射目標蛋白質-DNA相互作用區域高分辨率。
圖:使用EpiNext™ 切斷并運行快速試劑盒,對照抗體捕獲組蛋白DNA復合物(H3K9me3)來自從Hela細胞分離的1 ug染色質,用于DNA文庫制備。290 bps左右的峰值反映了單核小體(150 bps)。
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