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干貨分享丨線性不佳？酰胺醇類獸藥檢測關鍵點大揭密
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導讀
為了保障人們的食品安全，農業農村部發布了《GB 31658.20-2022 食品安全國家標準 動物性食品中酰胺醇類藥物及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》，該標準自2023年2月1日開始已正式實施。然而小編在走訪客戶時，發現不少實驗室在分析該類化合物的時候，不約而同出現了以下問題：
酰胺醇類藥物
酰胺醇類藥物又稱氯霉素類抗生素，屬于廣譜抗生素，常見的該類藥物主要包括氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等。農業農村部公告第250號已明確將氯霉素列入《食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物清單》。甲砜霉素為氯霉素類衍生物，而氟苯尼考是新一代氯霉素類抗生素，氟苯尼考胺是其主要代謝產物。根據《GB 31658.20-2022》，除氯霉素的內標選擇是氯霉素-D5外，其它3種均是采用的都是其-D3的內標物。
表1. 常見酰胺醇類藥物
酰胺醇類分析難點
從以上化學式可以看到，該類物質都含有一個或兩個氯元素，而氯元素非常顯著的特點則是有Cl35和Cl37的同位素。
我們以氟苯尼考為例，上圖和下圖分別為氟苯尼考標樣和氟苯尼考D3內標的質譜圖，可以看到，氟苯尼考除了在m/z 356和m/z 358處有較高響應外，在m/z 359處也有一定響應，而m/z 359正是氟苯尼考-D3的母離子。那么，氟苯尼考在m/z 359的響應是否會對內標物氟苯尼考-D3的響應造成干擾，從而導致了這一問題的產生？
為此，我們設計了一個小實驗。只進標樣溶液（不含內標），我們看到其在內標通道也是有響應的，以下是10 ng/mL氟苯尼考的色譜圖，氟苯尼考在定量通道上的峰面積是3457270，而在內標通道上的峰面積達到296836，占比8.6%。這樣也就不難理解隨著目標物濃度的不斷提高，內標的響應也會隨之增大了，這樣的情況下，內標法得到的線性曲線當然不佳了。
島津解決方案
如何解決這些含氯化合物-D3同位素內標因目標組分帶來的響應干擾問題？比較簡單的方法是避開受到干擾的離子而選擇其它離子作為母離子，如氟苯尼考-D3，選擇m/z 361作為母離子，因為氟苯尼考對m/z 361離子的貢獻更小。下表為化合物新選擇的離子對信息。
表2. 酰胺醇類藥物內標推薦離子對信息
改變成新的離子對信息后，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的線性改善非常明顯，這樣內標法的線性不佳問題就妥妥的解決啦！
總結
看了本期的難點項目經驗分享，相信大家都有所了解，如果分析的化合物中含有氯或溴元素時，可要小心了，經常可能出現因為內標離子通道選擇的不合適，造成目標物的同位素峰與內標物的質量數發生重疊的問題，從而影響到線性乃至定量有偏差。因此在分析這類化合物時，尤其是化學式中含有不止一個氯或溴元素的物質時，建議大家可以盡量購買含氘代、13C或15N個數比較多的同位素內標，另一方面，當化合物在內標的通道有干擾時，我們也可以選擇[M-H+2]-作為內標的母離子而不是基峰[M-H]-。
島津應用云后續還將發布獸藥分析大講堂系列，根據獸藥檢測技術的難點項目，陸續發布檢測關鍵點小貼士及解決方案，幫助大家共克食品安全難關。
撰稿人：駱丹
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