使用尼康 LV100 顯微鏡觀察西藥結晶顆粒(如藥物結晶),需結合儀器操作規范與結晶樣本特性,以下為詳細操作流程及注意事項:
一、樣本制備
固體藥物直接制片
取少量結晶顆粒(如西藥粉末)置于載玻片中央,滴 1-2 滴蒸餾水或生理鹽水,輕輕蓋上蓋玻片,避免氣泡(可用濾紙吸去多余液體)。
適用場景:觀察晶體原始形態(如針狀、片狀、棱柱狀)及團聚情況。
混懸液 / 溶解后制片
若藥物為混懸劑(如阿莫西林顆粒),搖勻后取上清液滴于載玻片;若為固體溶解后析出結晶,取少量溶液自然晾干或低速離心后制片。
適用場景:檢測溶液中結晶析出情況(如藥物穩定性問題,參考摘要 3)。
染色輔助觀察(可選)
對透明晶體(如無機鹽),可滴加 0.1% 亞甲藍或碘液染色,增強對比度(需根據藥物性質選擇染色劑,避免破壞晶體結構)。
二、尼康 LV100 顯微鏡操作步驟
開機與對光
打開電源,調節光源亮度至低(避免強光損傷樣本),旋轉聚光鏡光圈至中等開度。
切換至低倍物鏡(10×),轉動粗準焦螺旋使物鏡距載玻片約 2cm,左眼觀察目鏡,同時調節反光鏡(自然光用平面鏡,弱光用凹面鏡,參考摘要 7、9),直至視野明亮均勻。
低倍鏡定位
放置樣本,移動載物臺推進器,找到晶體密集區域(優先選擇邊緣或稀疏處,避免重疊干擾)。
緩慢調節粗準焦螺旋至晶體模糊成像,再微調細準焦螺旋至清晰(參考摘要 4、6 的調焦技巧)。
高倍鏡觀察
切換至高倍物鏡(40×),僅用細準焦螺旋微調(避免壓碎玻片)。觀察晶體細節:
形態:記錄形狀(如立方體、針狀、樹枝狀)、邊緣是否光滑(判斷純度,鋸齒狀可能含雜質)。
大小:估算粒徑(結合目鏡測微尺,或通過軟件自動測量,參考摘要 1 的圖像分析)。
排列:是否規則排列(提示結晶度高),有無團聚或無定形沉淀(提示穩定性問題)。
注:若需更高分辨率(如觀察細微晶格),可使用油鏡(100×),滴加香柏油后微調(摘要 7、9)。
光源與對比度優化
晶體反光強時,降低光圈或使用偏光片(尼康 LV100 可選配),突出晶體輪廓。
透明晶體可調節聚光鏡高度,利用暗場照明增強立體感(參考摘要 6 的光線調節技巧)。
三、結晶分析與判斷
藥物結晶特征參考
正常結晶:形態規則(如阿司匹林的片狀、磺胺類的針狀),大小均勻,無雜質(參考摘要 1 的結晶性質分析)。
異常結晶:大量細小顆粒、無定形沉淀或異物(可能提示藥物降解、純度不足,如摘要 3 的阿莫西林案例)。
注意事項
避免污染:制片工具需清潔,防止灰塵干擾(尤其注射劑結晶檢測)。
動態觀察:若需分析結晶生長或溶解過程(如穩定性實驗),可固定視野后定時拍照(結合 LV100 的延時攝影功能)。
結果記錄:拍攝典型圖像,標注放大倍數、日期,附文字描述(如 “大量棱柱狀結晶,伴少量無定形顆粒")。
四、常見問題處理
圖像模糊:檢查物鏡是否污染(用擦鏡紙清潔),或載玻片是否平整。
晶體反光過強:降低光源亮度,或嘗試斜射光照明(旋轉聚光鏡角度)。
結晶難分辨:對比空白載玻片背景,確認是否為藥物晶體(排除玻片劃痕或雜質)。
總結
尼康 LV100 憑借高分辨率物鏡(如 Plan Apo 系列)和靈活的光路調節,可清晰呈現西藥結晶的形態學特征。通過規范制片、分步聚焦和光源優化,不僅能鑒別結晶類型,還可輔助判斷藥物純度、穩定性(如是否析出影響療效的大顆粒結晶,參考摘要 2、3)。結合圖像分析軟件,更可量化晶體參數,為藥物研發或質量控制提供直觀數據。
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