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關鍵詞：ECL；Western blotting；HRP底物；化學發光
1. 產品概述
ECL試劑，即化學發光法檢測辣根過氧化物酶（HRP）的底物，是目前Western blotting檢測中zui為靈敏的試劑。目前市場上普通ECL試劑在使用過程中經常出現易淬滅、高背景、不穩定以及低豐度蛋白難以檢測等問題，影響zui終實驗結果。
翊圣生物根據目前市場現狀，集中免疫檢測領域的科研人員，在嚴格控制魯米諾原料的基礎上，不斷改良增強劑和穩定劑配方，針對不同需求開發了4類ECL試劑，包含增強型、超敏型、持久型和zui高靈敏度型產品，不僅可滿足實驗者對目的蛋白從低豐度到高豐度表達的檢測要求，同時可在不影響實驗的條件下，提高發光強度，使您獲得的圖像更加清晰。
«的靈敏度——皮克至低飛克級的抗原檢測
«更高的信噪比——發光底物，降低背景
«更利節省抗體——優化底物系統，更高抗體結合力
«優異的性價比——更高的性能，更低的價格
«的穩定性——新型氧化劑，常溫下穩定保存1年
2. 產品原理
ECL試劑檢測的核心原理為氧化反應發光：魯米諾（lumino）作為發光底物的主要成分，在堿性條件下，通過辣根過氧化酶（HRP）催化，被H2O2氧化生成3-氨基鄰苯二酸的激發態中間體，當其回到基態時發出光子，zui大發射波長為425 nm，光子信號可通過X射線膠片或CCD成像儀被捕獲。
3. 產品選擇
翊圣目前擁有的4種ECL產品，各具特色，能夠*用戶的免疫印跡應用需求。
那么，您的實驗應該選擇哪一種產品呢？
表1 ECL試劑選擇指南
Yeasen | Enhanced ECL 增強型 | Super ECL 超敏型 | SuperDura 持久型 | MaxiSignal zui高靈敏度型 |
適用樣本 | 靶點豐度較高，常規蛋白樣本 | 靶點豐度低，樣本有限 | 靶點豐度較低，樣本有限 | 靶點豐度極低，樣品珍貴 |
檢測靈敏度 | 中等皮克級 | 低皮克級 | 中等飛克級 | 低飛克級 |
信號持續時間 | < 2 h | < 12 h | < 24 h | < 8 h |
適用檢測系統 | 所有試劑均適用X射線膠片，CCD成像儀 | |||
一抗稀釋濃度 | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10,000 | 1:1000-1:50,000 | 1:5000-1:100,000 |
二抗稀釋濃度 | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10,000 | 1:50,000-1:250,000 | 1:100,000-1:500,000 |
推薦用膜 | NC膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 |
存儲穩定性 | 室溫1年 | 室溫1年 | 室溫1年 | 4℃ 1年，室溫半年 |
優勢 | 同一級別靈敏度中信號zui強 | ，適用于多數WB實驗 | zui長信號持續時間，極其適用于多次曝光 | 靈敏度，極其適用于痕量蛋白檢測 |
【注】：推薦抗體稀釋濃度為抗體儲液濃度為1 mg/mL時的稀釋濃度。
4. 產品應用
Yeasen ECL試劑對比其他品牌同級別產品具有更佳的使用效果。
圖1 Yeasen ECL超敏型底物Super與其他品牌同級別底物Pico檢測效果比對
圖2 Yeasen ECLzui高靈敏度型底物MaxiSignal與其他品牌同級別底物West Femto檢測效果比對
圖3 Yeasen ECL持久型底物SuperDura與其他品牌同級別底物West Dura檢測效果比對
5. 價格優勢
Yeasen致力于為您提供的產品。
圖4 Yeasen ECL產品與其他品牌同級別產品價格比對
6. 常見問題
遇到的問題 | 原因分析 | 推薦解決方法 |
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膠片出現反影 | 反應系統中HRP量過多 | 稀釋HRP標記物 |
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膠片出現棕色或黃色條帶 |
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熒光猝滅 | |||
操作時間過長，膜逐漸干掉 | 避免膜干掉 |
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保鮮膜、顯影液或定影液污染 | 養成良好的實驗習慣 |
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反應系統中HRP量過少 | 增加HRP標記物 |
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膠片無條帶顯現或者信號較弱 | 轉膜的效率低 | 提高轉膜效率，用預染Marker判斷。 |
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抗原、抗體量少或不匹配 | 增加抗原/抗體量或選擇合適抗原/抗體 |
| |
X光膠片有問題 | 曝光后X光譜全黑（而非透明色），則表明膠片已*曝光，使用新的X光片 |
| |
顯影/定影液有問題 | 可預先曝光一張膠片進行判斷，如有問題當換用新的顯影/定影液 |
| |
反應系統中HRP量過多 | 稀釋HRP標記物 |
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高背景 | 一抗二抗濃度太高 | 降低抗體濃度，延長封閉時間 |
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抗體未清洗干凈 | 增加洗膜次數 |
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封閉不* | 優化封閉條件 |
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使用錯誤的封閉劑 | 使用其他的封閉劑 |
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過度曝光 | 降低曝光時間 |
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抗體特異性差 | 更換抗體 |
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反應系統中HRP量過多 | 稀釋HRP標記物 |
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條帶有空斑 | 抗原以及二抗的濃度過高 | 稀釋樣品重新跑膠，也可將混合好的顯色液冰浴后，加到膜上即刻快速顯色。 |
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帶型不規則 | 轉膜有氣泡或甲醇（對于PVDF膜）水化不均勻 | 優化轉膜條件。 |
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膠片出現斑點 | HRP標記物聚集體 | 0.2μm膜過濾HRP標記物 |
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非特異性條帶 | 反應系統中HRP量過多 | 稀釋HRP標記物 |
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SDS引起蛋白非特異性結合 | 實驗流程中不使用SDS |
| |
抗體特異性差 | 更換抗體 |
| |
封閉不足 | 增加封閉時間或使用其他封閉劑 |
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7. 訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 價格 |
Super ECL Detection Reagent 化學發光超敏顯色試劑盒 | 36208ES60 | 100 mL | 329.00 |
36208ES76 | 500 mL | 1289.00 | |
36208ES80 | 1000 mL | 2349.00 | |
Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit 增強型ECL化學發光檢測試劑盒 | 36222ES60 | 100 mL | 259.00 |
36222ES76 | 500 mL | 1089.00 | |
36222ES80 | 1000 mL | 1989.00 | |
SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate 持久性化學發光底物 | 36223ES10 | 10 mL | 267.00 |
36223ES60 | 100 mL | 1557.00 | |
36223ES70 | 200 mL | 2857.00 | |
36223ES76 | 500 mL | 5257.00 | |
SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate zui高靈敏度化學發光底物 | 36224ES10 | 10 mL | 287.00 |
36224ES60 | 100 mL | 1757.00 | |
36224ES70 | 200 mL | 3257.00 | |
36224ES76 | 500 mL | 5857.00 |
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