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細胞分選
根據細胞所具有的特性把某種特定的細胞亞群從混合的細胞樣品中分離出來的一種技術,它是對某一特定細胞進行生化分析和功能分析的前提和基礎。
表1. 常見細胞分選技術(磁性分選、流式分選)對比
常見細胞分選技術 | 分選結果 | 安全性 | 其他 |
細胞磁性分選技術 | 1、適宜進行單Marker分選 2、分選純度好,得率高 3、分選對細胞無損,尤其適用于免疫細胞分選 | 1、陰選試劑盒(需要的細胞標記)。 2、陽選納米級磁珠安全、可靠,生物可降解基質,無需額外去除。
| 1、不需要昂貴的設備、操作簡單。 2、陰選試劑盒無需分選柱,陽選納米磁珠所需磁珠用量少。
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流式細胞分選技術
| 1、多Marker分選,純度高,得率好 2、傳統流式分選:高壓高速對細胞沖擊較大,細胞受損嚴重
| 1、容易交叉污染 2、帶熒光抗體使用存在爭論 | 1、設備昂貴、操作難度較大,需要專門操作人員進行操作和數據分析 |
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由上表可知,細胞磁性分選技術由于其簡單快捷的操作,分選細胞純度好、得率高、活性好等特點,已成為目前使用廣泛的細胞分選技術。
目前細胞磁性分選可以分為陰性分選和陽性分選兩種方式。陰性分選一般搭配無柱分離(陰選抗體加磁珠兩步標記),陽性細胞分選一般搭配有柱分離(陽選抗體磁珠一步標記)。
表2. 陰性分選(無柱分離)、陽性分選(有柱分離)對比
磁性分選技術 | 陰性分選(無柱分離) | 陽性分選(有柱分離) |
磁珠粒徑 | 粒徑250 nm~4.5 μm的磁珠 | 粒徑<100 nm的磁珠 |
磁珠標記細胞 | 生物素標記抗體Cocktail(所有不需要細胞的表面標識抗體)加入細胞懸液中孵育,鏈霉親和素磁珠再加入細胞懸液孵育,磁珠標記所有不需要的細胞。 | 陽性抗體磁珠(帶一種需要細胞表面標識抗體的磁珠)加入細胞懸液孵育,磁珠標記需要的細胞。 |
細胞分選 | 磁珠標記細胞的試管入磁鐵,并孵育,倒出非標記細胞,即為所需細胞。 | 分離柱進磁鐵,加入磁珠標記細胞,加緩沖液洗出非標記細胞,分離柱取出磁鐵,用活塞推出磁珠標記細胞。 |
優點 | 需要的細胞未經標記。 | 分選細胞純度高、特異性高, 所需磁珠用量少。 |
缺點 | 需要知道所有不需要細胞的表面標識抗體, 磁珠用量多,特異性稍差。 | 可能會對細胞產生一定的激活作用 |
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陰性分選(無柱分離)流程示意圖:
陽性分選(有柱分離)流程示意圖:
翌圣生物擁有高性能單克隆抗體研發平臺,憑借其豐富的抗體和磁珠等開發經驗,全力開發推出細胞分選產品,提供高質量的分選磁珠、耗材及設備,滿足客戶的研發和生產需求。目前已上新針對小鼠免疫細胞的CD3、CD4、CD8陰選試劑盒和分離磁鐵,針對小鼠免疫細胞的科研級CD4、CD8陽選磁珠,后續產品持續開發中。
翌圣生物提供小鼠T細胞分選整體解決方案
表3. 翌圣小鼠T細胞分選系列產品選購指南
產品定位 | 小鼠T細胞陰選試劑盒(陰選,無柱分離) | 小鼠T細胞陽選磁珠(陽選,有柱分離) | |||
產品貨號 | 37653ES | 37657ES | 37661ES | 37607ES | 37611ES |
產品名稱 | Mouse CD3+T Cell Isolation Kit(Negative Isolation) | Mouse CD4+T Cell Isolation Kit(Negative Isolation) | Mouse CD8+T Cell Isolation Kit(Negative Isolation) | Mouse CD4 Nanobeads | Mouse CD8 Nanobeads |
規格 | 10T/ 50T/ 100T | 10T/ 50T/ 100T | |||
分選能力 | Up to 1×108 cells/Up to 5×108 cells/Up to 1×109 cells | Up to 1×108 cells/Up to 5×108 cells/Up to 1×109 cells | |||
有效期 | 2~8℃保存,有效期1年。 | 2~8℃避光保存,有效期6個月。 | |||
產品特點 | 操作簡單:無需分選柱,使用磁性分離器即可實現目的細胞的分離。 純度高:分選細胞純度可達95%以上; 速度快:15分鐘即可分選得到目的細胞。 活性好:陰性分選,磁珠不與細胞直接接觸,分選后細胞無異常激活,不影響下游實驗。 | 安全性高:磁珠粒徑(50~100 nm)與進口競品等同,低毒。 效果好:純度高、活性高、回收率高。 操作方便:生物可降解基質、無需額外去除。 質量高:穩定性高、兼容性高。 |
測試數據
小鼠T細胞陰選試劑盒測試
圖1. 翌圣小鼠CD3、CD4、CD8分選試劑盒(陰選)分選免疫細胞的純度對比圖
備注:使用翌圣小鼠CD3、CD4、CD8分選試劑盒(陰選)從 C57BL/6 小鼠脾臟細胞中分選CD3、CD4、CD8 T細胞,通過流式檢測分選得到的細胞組分中 CD3、CD4、CD8 T細胞純度,分選后細胞純度分別為97.6%、98.8%、97.1% 。
小鼠T細胞陽選磁珠測試
圖2. 翌圣小鼠CD4、CD8分選磁珠(陽選)和進口競品分選免疫細胞的純度、回收率、細胞活率對比圖
備注:分別使用翌圣小鼠CD4、CD8分選磁珠與進口競品磁珠從C57BL/6 小鼠脾臟細胞中分選CD4、CD8 T細胞,翌圣小鼠CD4、CD8分選磁珠分選后細胞的純度、回收率、細胞活率均與進口競品相當。
產品信息
產品定位 | 產品名稱 | 貨號 | 規格 | 分選能力 |
小鼠T細胞陰選試劑盒 (陰選,無柱分離) | Mouse CD3+T Cell Isolation Kit(Negative Isolation) 小鼠CD3+T細胞分選試劑盒(陰選) | 37653ES10/50/60 | 10 T/50 T/ 100 T | Up to 1×108 cells/ Up to 5×108 cells/ Up to 1×109 cells |
Mouse CD4+T Cell Isolation Kit(Negative Isolation) 小鼠CD4+T細胞分選試劑盒(陰選) | 37657ES10/50/60 | 10 T/50 T/ 100 T | Up to 1×108 cells/ Up to 5×108 cells/ Up to 1×109 cells | |
Mouse CD8+T Cell Isolation Kit(Negative Isolation) 小鼠CD8+T細胞分選試劑盒(陰選) | 37661ES10/50/60 | 10 T/50 T/ 100 T | Up to 1×108 cells/ Up to 5×108 cells/ Up to 1×109 cells | |
5 mL金屬磁力架 | 80463ES03 | 1個 | ||
小鼠T細胞陽選磁珠 (陽選,有柱分離) | Mouse CD4 Nanobeads 小鼠CD4分選磁珠 | 37607ES10/50/60 | 10 T/50 T/ 100 T | Up to 1×108 cells/ Up to 5×108 cells/ Up to 1×109 cells |
Mouse CD8 Nanobeads 小鼠CD8分選磁珠 | 37611ES10/50/60 | 10 T/50 T/ 100 T | Up to 1×108 cells/ Up to 5×108 cells/ Up to 1×109 cells |