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導 語
想評估抗癌藥物療效？研究腫瘤生長機制？皮下成瘤實驗是腫瘤研究中的經典模型！但如何規范操作確保實驗成功率？需要哪些關鍵試劑？本文為您一一解析！
皮下成瘤（Subcutaneous Tumorigenesis）是將腫瘤細胞接種到小鼠皮下，模擬腫瘤生長和轉移的體內實驗模型。因其操作簡便、成瘤周期短、可視化強，被廣泛用于：
? 抗腫瘤藥物療效評價；
? 腫瘤發生機制研究；
? 免疫治療及基因治療開發。
準備對數期生長的、細胞密度達80 - 90%左右的HepG2細胞，于收集細胞前一天晚上更換新鮮培養基。
胰酶消化細胞，待細胞變圓未脫離培養皿時，去除胰酶，加入PBS/無血清培養基制成細胞懸液，離心清洗一次，重懸至終濃度為1×108個細胞/mL。
將細胞懸液和Ceturegel™高濃度基質膠在4℃環境下按1:1比例進行稀釋，制備成終濃度為5×107個細胞/mL（Ceturegel™基礎濃度基質膠建議濃度在70%以上）。
左手抓取固定裸鼠，于裸鼠右肩處皮下注射，接種時，針頭在皮下進針深一點，約1 cm深，以減少注射后細胞懸液從針眼溢出，接種體積為200 μL。(這一過程盡量在半小時內完成，途中細胞懸液放在冰上以減緩細胞凋亡及防止出現凝膠現象）。
將裸鼠放回籠內繼續飼養，1周~1月左右可看到腫瘤出現，并根據實驗設計在腫瘤體積達到要求時對裸鼠進行安樂si，并拍照。
常見的荷瘤不成功可能的原因？
① 細胞的狀態是成瘤實驗的關鍵，所以細胞生長狀態一定要好，取處于對數生長期的細胞，細胞達 80 - 90% 左右密度為宜，收集細胞前一天晚上更換新鮮培養基。
② 可能是小鼠周齡太大，一般選擇 4 - 6 周齡裸鼠，小于 4 周可能不耐受過早死亡，大于 6 周免疫力會增強，不易成瘤。
③ 可能是小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠。
④ 接種部位也是成瘤實驗的重要因素。選擇血管豐富且易操作的部位接種，如腋下、腹股溝、側腹部及頸背部等部位，其中腋下中后部皮下較好，成瘤率高，比較推薦打腋下，一人操作很方便，后續量瘤子也很好操作。
腫瘤長起來后又消失的原因？
腫瘤生長過程中，如果出現腫瘤塊先縮小，后變大的現象，很可能是由于炎癥反應，腫瘤細胞被小鼠自身吸收造成的。繼續觀察腫瘤細胞吸收之后是否經過幾周還能長出來，如若后續腫瘤依舊未長出來，可考慮更換免疫缺陷程度更大的小鼠。
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質膠 | 40183ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free基質膠 | 40187ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL |
PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red胰酶溶液（0.25%），含酚紅 | 40126ES | 100 mL |
PBS(1×)細胞培養級 | 41403ES | 500 mL |
