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近年來，隨著分子生物學技術的迅速發展，基于核酸檢測的診斷方法已大量建立并廣泛應用于人類疾病的實驗室檢測中。與其他的核酸擴增技術相比，等溫擴增有快速、高效、特異的優點且無需專用的設備，所以它一經出現就被許多學者認為是一種有可能與PCR媲美的檢測方法。
因此，相信恒溫擴增技術為基礎的診斷儀器和試劑盒的開發和應用將會是未來分子診斷POCT的一個新方向。
主流恒溫擴增技術原理介紹
1、LAMP環介導等溫擴增技術
原理：環介導等溫擴增（loop mediated isothermal amplification,LAMP）使用具有鏈置換特性的Bst DNA聚合酶，針對靶基因的6個區域設計4種特異引物，在等溫條件下高效、快速、特異性擴增靶標序列，可在60-65℃進行恒溫擴增，15-60分鐘左右即可實現109～1010倍的核酸擴增。
優勢及應用：等溫擴增因其反應快速、特異高、設備簡單易操作、結果易于鑒定等優點，已經應用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉基因產品檢測等領域，并且還將廣泛應用于臨床傳染病診斷、環境監測、食品安全等領域，已經成為一種適用于分子POCT平臺的理想方法。
分類：LAMP檢測方法分為多種，包括比濁法、pH顯色法、熒光染料法（如NHB、鈣黃綠素、SYBR Green、Syto等）、熒光探針法等。
2、RPA重組酶聚合酶擴增技術
原理：重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成，對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件，主要依賴于重組酶、Bsu酶和SSB蛋白。可以在37~42 ℃條件下，10~30 min內實現待測靶標的快速檢測。
優勢及應用：它具有反應靈敏度高、特異性強、對儀器依賴程度低且可整合多種檢測模式等優點，特別適用于基層和現場即時檢測，可廣泛應用于體外診斷、動物疫病、食品安全、生物安全、農業等領域。
分類：RPA檢測方法分為多種，包括電泳法、EXO探針法、Fpg探針法、測流層析試紙條（LF-RPA）以及絮凝分析檢測等。
部分產品性能展示
01 pH顯色法RT-LAMP試劑
pH顯色法RT-LAMP是將可視染料作為敏感指示劑，在60-65℃等溫條件下，利用恒溫水浴鍋或普通PCR儀完成一步法RNA核酸擴增。30min即可通過反應后顏色的變化，判斷是否感染病原體，結果更直觀（陽性為橙黃色，陰性為洋紅色）。該方法適用于大批量人群的快速檢測。
推薦產品：
RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit（13906ES）
RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version Freeze-Dryable Kit（13920）（可凍干版）
性能展示：
02 熒光染料法RT-LAMP試劑
熒光染料法RT-LAMP是將熒光染料（如SYBR Green、Syto等）作為熒光標記物，在擴增反應中與雙鏈DNA結合后，熒光信號會增強800-1000倍。使用熒光定量PCR儀在60-65℃恒溫條件下進行測試，約30min后即可通過擴增結果判斷是否感染病原體，還可搭配微流控芯片或便攜式檢測儀快速檢測。
推薦產品：RT-LAMP Dye Assay Kit（UDGplus）（13762ES）
性能展示：
RT-LAMP/RPA mix選擇指南
產品分類 | RT-LAMP mix | RPA mix | ||
產品名稱 | RT-LAMP Dye Assay Kit(UDG plus) | RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit | RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version Freeze-Dryable Kit | Quick Fuse Amplifier |
產品貨號 | 13762ES | 13906ES | 13920ES | 16702ES |
產品類別 | 熒光染料法 | pH顯色法 | pH顯色法 | 探針法 |
產品組份 | 2組份 Buffer、酶mix | 3組份 Buffer、RT酶、Bst酶 | 4組份 Buffer、RT酶、 Bst酶、凍干保護劑 | 4組份 Buffer、酶mix、 醋酸鎂 |
支持凍干 | 否 | 支持，不含凍干保護劑 | 支持，含凍干保護劑 | 不支持 |
LAMP/RT-LAMP原酶選擇指南
產品分類 | Bst酶 | 逆轉錄酶 | UDG酶 | |||
產品名稱 | Bst Plus | Lyophilized Bst Plus | Ⅲ Reverse Transcriptase | III Reverse Transcriptase, Glycerol-free | UDG | UDG,Glycerol-Free |
產品貨號 | 14402ES | 14405ES | 11111ES | 11297ES | 14455ES | 14001ES |
酶活濃度 | 40 U/μL | 60 U/μL | 200 U/μL | 600 U/μL | 1 U/μL | 1 U/μL |
產品組份 | 3組份 Buffer、酶、硫酸鎂 | 2組份 Bst凍干粉、復溶液 | 2組份 Buffer、酶 | 單組份 | 單組份 | 單組份 |
支持凍干 | 否 | 是 | 否 | 是 | 否 | 是 |
RPA原酶選擇指南
產品分類 | Bsu聚合酶 | 重組酶 | 重組蛋白 | 單鏈結合蛋白 | 肌酸激酶 | 核酸外切酶 |
產品名稱 | Bsu | T4 UvsX | T4 UvsY | gp 32 | Creatine Kinase | Exonuclease III |
產品貨號 | 11078ES | 11079ES | 11080ES | 11081ES | 14502ES | 14525ES |
酶活濃度 | 5 U/μL | 2 μg/μL | 2 μg/μL | 5 μg/μL | 2 μg/μL | 100 U/μL |
產品組份 | 單組份 | 單組份 | 單組份 | 單組份 | 單組份 | 2組份 Buffer、酶 |
支持凍干 | 否 | 否 | 否 | 否 | 否 | 否 |
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