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隨著糖蛋白質組學和抗體藥研究的迅速發展，糖基化修飾也備受關注。細胞與細胞、細胞與病原體的接觸主要是通過糖與蛋白質相互作用完成的，糖基化決定了糖復合物的粘附特性。在IgG中，Fc區Asn297處的保守N-連接糖對其活性也至關重要。此外，一些抗體還具有額外的N-糖鏈，與 Fc區 Asn297處的保守位點一起影響抗體的識別、半衰期和免疫反應。
蛋白質糖基化是一種復雜的翻譯后修飾，涉及糖鏈在蛋白質特定位點的連接，依據糖鏈類型的差異，糖蛋白被分為N-連接糖蛋白、O-連接糖蛋白等；另外，蛋白質糖基化還受到宿主細胞類型和發酵條件（如培養基、pH值、溫度等）波動的影響。因此，糖蛋白在糖基化模式上通常具有異質性，包括糖基化位點、糖基化程度以及糖鏈的具體結構，使得糖鏈分析和結構表征工作具挑戰，為了程度上獲得糖鏈結構信息，目前糖鏈分析的主要策略是先把糖鏈從蛋白上游離下來，然后進行詳細的分析表征。在此策略中，高效、準確、穩定的去糖基化方法至關重要。
酶促法是目前應用比較廣泛的去糖基化方法。
其中PNGase F (N-糖苷酶 F)是去除糖蛋白中幾乎所有 N-連接寡糖的有效的酶促方法，可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復雜的寡糖糖蛋白，特異性除去N-連接糖。切割位點為：最內側N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺殘基之間的酰胺鍵，同時將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉化為天冬氨酸。
當α1-6巖藻糖位于GlcNAc核心時，PNGase F也可以切割；只有當α1-3巖藻糖位于GlcNAc核心時（常見于植物和昆蟲糖蛋白），PNGase F不能切割。
但常規PNGase F酶促反應釋放抗體N-聚糖需要長達幾小時，同時由于聚糖釋放存在偏好性，不全的去糖基化可能導致結果的偏差，所獲得的聚糖分布不能代表治療性抗體的正確組成。因此，盡量在最短時間內獲得準確的 N-糖鏈糖譜對于抗體及抗體融合蛋白等生物治療劑生產過程中糖基化監測至關重要。
Fast PNGase F，N-糖苷酶 F（快速版）是一種經過優化的重組試劑,可以在數分鐘內對抗體、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白進行快速的去糖基化。此酶能夠迅速且無偏好性地去除所有的 N-糖鏈，并且可直接進行下游的色譜或質譜分析。翌圣Fast PNGase F，N-糖苷酶 F（快速版） 簡化了實驗流程，可在保證靈敏度和重復性的前提下減少實驗時間。
產品特點
速度快：數分鐘內進行快速的去糖基化；
純度高：無蛋白酶、糖苷酶污染，純度≥95%；
無偏好性：迅速且無偏好性地去除所有的 N-糖鏈；
兼容性好：可直接進行下游的色譜或質譜分析。
測試數據
一步法蛋白質去糖基化
10 ug底物/100 ug抗體和ddH2O混合至16 uL的總體積；
加入4 μL的Fast PNGase F Buffer（5x），終體積為20 uL；
加入1 μL的Fast PNGase F；
在50℃下孵育10分鐘。
兩步法蛋白質去糖基化：
10 ug底物/100 ug抗體和ddH2O混合至16 uL的總體積；
加入4 μL的Fast PNGase F Buffer（5x），終體積為20 uL；
在80℃下孵育2分鐘，冷卻至室溫；
加入1 μL的Fast PNGase F；
在50℃下孵育10分鐘。
結論
1.翌圣Fast PNGase F在同等反應條件下同進口競品有著等同的酶切效率或高于進口競品；
2.推薦進行兩步法酶切，可保證更高的酶切效率。某些抗體（如Fab N-糖基化）需要預熱步驟來進行高效的脫糖基化。
另外，我司還提供常規PNGase F，包括PNGase F, N-糖苷酶 F（Cat#20407ES，比活性：100000 U/mL），PNGase F, N-糖苷酶 F（Cat#20415ES，比活性：750000 U/mL），以及其他類型的糖苷酶，如Endo H糖苷內切酶H（Cat#20414ES），Endo S糖苷內切酶S（Cat#20413ES）。
貨號 | 20406ES | 20407ES | 20415ES | 20414ES | 20413ES |
產品 名稱 | Fast PNGase F | PNGase F | PNGase F | Endo H | Endo S |
來源 | 酵母重組表達 | 酵母重組表達 | 酵母重組表達 | 酵母重組表達 | 大腸桿菌表達 |
比活 | 不適用 | 100000U/mL | 750000U/mL | 1000000U/mL | 8000 U/mg |
切割 位點 | 幾乎所有的N-連接糖 | 幾乎所有的N-連接糖 | 幾乎所有的N-連接糖 | N-連接高甘露糖 | 從 IgG 重鏈的殼二糖核心結構之間切除N-連接糖 |
酶切 時間 | 10 min | 1-3 h | 1-3 h | 1-3 h | 1 h |
糖組學 | 適合 | 適合 | 適合 | 適合 | 適合 |
蛋白質組學 | 適合 | 適合 | 適合 | 適合 | 適合 |
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
Fast PNGase F, N-糖苷酶 F(快速版) | 20406ES20/50 | 20 T/50 T |
PNGase F (N-糖酰胺酶F或肽N-糖苷酶 F） | 20407ES01/02 | 15000 U /75000 U |
PNGase F, Recombinant, Expressed in Yeast 酵母重組表達N-糖苷酶 F | 20415ES01/02 | 15 kU/75 kU |
Endo H糖苷內切酶H | 20414ES92/97 | 10000 U /50000 U |
Endo S糖苷內切酶S | 20413ES80/90 | 1000 U/ 5 x 1000 U |
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
IdeS Protease(免疫球蛋白G降解酶) | 20412ES84/90 | 2000 U/5000 U |
