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NGS，即下一代測序技術，是近年來基因測序領域的一次重大突破。相較于傳統的測序方法，NGS具有高通量、高準確性、低成本等諸多優勢，使得基因測序變得更加高效和便捷。通過NGS技術，科學家們能夠更深入地了解基因組的結構和功能，為疾病診斷、治療以及新藥研發等領域提供了強有力的支持。
酶切法建庫：NGS的得力助手
在NGS的研究中，建庫是一個至關重要的環節。建庫的質量直接影響到測序結果的準確性和可靠性。而酶切法建庫，避免了傳統的機械打斷，無需打斷儀，流程簡便，可同時處理多個樣，更適合于自動化建庫，滿足大規模基因組研究的需求，是目前應用廣泛的建庫方法之一。
酶切法建庫有其優勢，但是也有其劣勢，比如：酶切偏好性、引入假陽性、起始量適用范圍窄等，翌圣借助ZymeEditor（點擊了解更多）酶改造及發酵純化工藝平臺，對酶進行進化改造，及不斷優化的反應體系，克服了酶切法建庫方法學上的局限性，讓酶切法建庫更精準更快速！
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3（Cat#12194）
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3 是一款可用于Illumina®和MGI®高通量測序平臺的新一代酶切法建庫試劑盒。本試劑盒將片段化模塊與末端修復模塊合二為一，極大的降低了建庫的時間和成本、連接模塊的酶和buffer預混，簡化了操作流程，更加適合于自動化建庫。
實驗原理
圖1.酶切法建庫原理
產品優勢
高效穩定的片段化效果
以不同質量等級的FFPE DNA樣本建庫，樣本投入量100 ng，采用同一酶切條件4℃ 1 min，37℃10 min，72℃ 20 min，4℃ hold，文庫主峰在300 bp左右；數據顯示不同降解程度的FFPE樣本同一酶切條件下，文庫主峰基本一致。
FFPE DNA質量等級 | A | B | C | D |
文庫產量（ng） | 2550 | 2470 | 1760 | 1790 |
文庫主峰（bp） | 295bp | 301bp | 288bp | 278bp |
圖2.FFPE DNA的酶切文庫峰圖
高效穩定的片段化效果
Human gDNA為模板，以不同的樣本投入量，12194與競品W試劑盒相比，12194的文庫產量與競品相當。數據顯示不同投入量文庫產量對比，12194有高效的文庫轉化效率。
極低的假陽性率
NGS建庫引入的假陽性問題主要包括嵌合序列和堿基錯摻等因素，在酶切法片段化時將會引入一些假的嵌合序列，12194對片段化酶全面升級，解決了酶切假陽性的痛點。
用12194酶法片段化建庫試劑盒對3種標準品樣本（FFPE標準品、gDNA標準品、ctDNA標準品）建庫，并和競品W進行了頭對頭的比較。數據顯示，無論是FFPE樣本、gDNA、還是ctDNA，12194的Soft Clip、false chimeric都低于或近似于競品W。
圖4.12194與競品W的數據質量對比
優異的位點檢出率
用12194和競品W建庫雜交捕獲測序對比，模板類型為腫瘤SNV 5% gDNA標準品GW-OGTM006和腫瘤gDNA野生型標準品GW-OGTM005，將突變位點稀釋為 0.5% 和0.1%，模板投入量100ng，PCR擴增循環數為7，捕獲panel為何因Cancer SLC Panel，平均測序深度為5000×，比較捕獲測序數據。數據顯示12194對突變位點檢出率與目標檢出率一致。
圖5.12194與競品W的低頻位點檢出率
產品訂購指南
產品名稱 | 產品貨號 | 產品規格 |
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3一步法DNA建庫試劑盒V3 | 12194ES08 | 8 T |
12194ES24 | 24 T | |
12194ES96 | 96 T |
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