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隨著蛋白質組學技術的迅猛發展，重組蛋白的使用在近年來大大增加，為了提高重組蛋白的產量或賦予重組蛋白新的特性（這些特性可以用來對重組蛋白進行純化或檢測），可以在克隆過程中添加額外的標簽到目標蛋白的N端或者C端，標簽可根據功能分為兩類，純化標簽和可溶性標簽，純化標簽可用于親和層析，快速純化蛋白；可溶性標簽用于促進蛋白質的正確折疊，增加可溶性。
常見的標簽有6*His、GST、MBP、Strep(Ⅱ)、Flag、SUMO和組合式雙標簽或多標簽。GST、MBP、SUMO等蛋白標簽由于分子量較大，通常需要去除，以消除其對目標蛋白的結構與功能的影響；多肽標簽（如Strep(Ⅱ)、Flag）分子量較小，免疫原性較低，基本不影響蛋白質的結構和功能，通常可以不用去除，但用于結構生物學或其他較高級研究的蛋白通常也要將小分子量多肽標簽去除，以達到最佳效果。實際操作中化學切割方法較為少用，因為不僅裂解位點的特異性低，還可能對目的蛋白產生不必要的修飾。目前常用的是反應條件溫和且具有高度的位點特異性的酶解法。
表1. 常用的蛋白酶及對應切割位點
蛋白酶 | 表達宿主 | 切割位點 | 酶的作用 |
腸激酶 | 大腸桿菌 | Asp-Asp-Asp-Asp-Lys | 去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的標簽 |
TEV Protease
| 大腸桿菌 | Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly
| 融合蛋白標簽切除
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3C Protease | 大腸桿菌 | Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro | 特異切割含有3C酶切位點的融合蛋白
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SUMO Protease | 大腸桿菌 | 識別完整的含有100個氨基酸的SUMO標簽蛋白 | 高效地把SUMO從融合蛋白上切割下來
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牛凝血酶 | 牛的血漿純化制得 | Leu-Val-Pro-Arg-↓-Gly-Ser和Gly-Arg-↓-Gly | 融合蛋白標簽切除 |
克隆過程中構建相應的氨基酸識別序列，即可保證后續可通過合適的蛋白酶對融合蛋白標簽進行切除。
小翌已為大家準備好了性價比的幾款蛋白酶，下面帶大家一一了解下：
重組腸激酶（rEK）是高純度的牛腸激酶輕鏈亞基，它有著和天然提取的腸激酶同樣特異的切割酶活性，切割位點Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽，是N末端融合通常選擇的蛋白酶,在其他殘基的不規則切割發生水平較低。
翌圣的重組腸激酶（rEK）采用大腸桿菌重組表達，無外源性的病毒污染，生產過程不使用任何動物源原料，純度高、活性高、特異性強、適用范圍廣，在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。本品不含標簽，由于具有酶切活性，酶切反應使用量少，不影響下游蛋白應用，可不考慮去除。后續如需去除可用陰離子交換樹脂（如DEAE-6FF）對其進行洗脫。推薦洗脫條件如下：平衡緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，洗脫緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
凝血酶是由大小分別為31 KD和6 KD的兩條肽鏈通過二硫鍵組成的一種絲氨酸蛋白水解酶，可從動物血漿中利用已激活凝血酶原水解制得；凝血酶切割序列專一，水解效率高，在分子生物學、生物化學或生物工程制藥研究中常作為工具酶用于重組融合蛋白（包含凝血酶識別位點）的特異性斷裂。
翌圣的牛凝血酶是從牛的血漿純化制得，具有純度高、比活高、不含有其他蛋白酶活性、滅活病毒、生產穩定性好等特點。該酶最適切割位點：A-B-Pro-Arg-↓-X-Y （其中，A和B為疏水氨基酸，X和Y為非酸性氨基酸），常見的識別序列為：1. Leu-Val-Pro-Arg-↓-Gly-Ser。2. Gly-Arg-↓-Gly。凝血酶可從切割產物中用苯甲脒或肝素瓊脂糖親和純化去除。
翌圣的重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內表現出更強的穩定性和特異性。rTEV是一種用來切除融合蛋白上親和標簽的常用工具酶，具有很強的位點特異性，嚴格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。普遍應用的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃時可達到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和溫度4-30℃的廣泛范圍內皆有活性（見表2），使得反應條件的選擇可根據目的蛋白的情況而靈活變動。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His標簽，通過Ni-NTA樹脂去除，以達到純化目的蛋白的目的。
表2. 不同溫度下rTEV酶切活性
3C蛋白酶是切割小RNA病毒科非結構蛋白的關鍵酶，在病毒復制過程中發揮著重要作用。鼻病毒屬于小RNA病毒科，其中的人鼻病毒3C蛋白酶基因編碼區全長552bp，編碼的蛋白質相對分子質量約為22000 Da。人鼻病毒3C蛋白酶具有高度的酶切特異性，能特異切割位于Gln-Gly之間的肽鍵，識別位點為 Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro。
翌圣將人鼻病毒3C蛋白酶的編碼區基因，在大腸桿菌中進行重組表達，純化后獲得了高純度的重組3C蛋白酶，該蛋白酶能特異切割含有3C酶切位點的融合蛋白，具有良好的生物學活性。同時，翌圣生產的3C蛋白酶帶有GST和MAT標簽蛋白，有利于后期將其從酶切體系中去除。
SUMO蛋白酶識別完整的含有100個氨基酸的SUMO（Small Ubiquitin-like Modifier）標簽蛋白，并能高效地把SUMO從融合蛋白上切割下來。與EK和TEV等蛋白酶的識別位點相比，由于其識別序列長，所以SUMO蛋白酶酶切反應有很高的特異性，且在較寬范圍的反應環境體系中保持較高的活力，例如溫度（4-30℃）、pH（5.5-9.5）等。SUMO蛋白酶還具有多聚His標簽，便于使用親和層析的方法去除SUMO蛋白酶，純化目的蛋白。
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 目錄價/元 |
Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli | 20401ES60/70/76 | 100 U/200 U /500 U | 425/645/1245 |
Bovine Thrombin,High Specific Activity,>2000 IU/mg 牛凝血酶(高活力,>2000 IU/mg) | 20402ES03/05 | 1 KU/2 KU | 536/956 |
rTEV Protease重組煙草蝕紋病毒蛋白酶 | 20403ES80/92 | 1 KU/ 10×1000U | 215/1595 |
3C Protease | 20409ES60/76/80 | 100 U/500 U /500U×2 | 372/923/1473 |
SUMO Protease | 20410ES60/70/80 | 100 U/500 U /1000U | 223/873/1473 |
DEAE Agarose 6FF | 20540ES25/60 | 25 mL/100 mL | 300/788 |
Heparin Agarose 6FF(肝素親和純化介質) | 20493ES08/25 | 5 mL/25 mL | 600/2500 |
HisSep Ni-NTA Agarose Resin | 20502ES10/50 | 10 mL/50 mL | 678/2848 |
GSTSep Glutathione Agarose Resin | 20507ES10/50/60 | 10 mL/50 mL /100 mL | 928/3848/6898 |
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 目錄價/元 |
Human α-Thrombin(Factor IIa) | 20408ES80 | 1000 U | 2898 |
PreScission Protease(PSP) | 20425ES60/76 | 200 U/500 U | 1126/2136 |
IdeS Protease（免疫球蛋白 G 降解酶） | 20412ES84/90 | 2000 U/ 5000 U | 2233/4953 |
PNGase F (N-糖酰胺酶F或肽N-糖苷酶 F） | 20407ES01/02 | 15000 U/ 75000 U | 1125/4525 |
PNGase F, Recombinant, Expressed in Yeast 酵母重組表達N-糖苷酶 F | 20415ES01/02 | 15000 U/ 75000 U | 1225/4925 |
Endo H糖苷內切酶H | 20414ES92/97 | 10000 U/ 50000 U | 585/2195 |
Endo S糖苷內切酶S | 20413ES80/90 | 1000 U/ 5×1000 U | 325/1365 |
Recombinant Trypsin（MS-SAFE） | 20416ES60 | 100 µg | 595 |
