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Exonuclease I:特異性去除單鏈DNA,PCR引物去除的選擇

2023-8-15  閱讀(294)

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核酸外切酶I(Exonuclease I)是一種對變性或單鏈脫氧核糖核酸具有高度選擇性的核酸外切酶,作用時,Exonuclease I從單鏈聚脫氧核糖核苷酸的3 羥基端開始攻擊,隨后逐步釋放出脫氧核糖核苷5 ' -單磷酸鹽,但末端二核苷酸會保持完整,對雙鏈DNA或RNA無活性。常用于在Sanger測序或SNP分析之前去除PCR反應(yīng)中的單鏈引物、去除巢式PCR中的單鏈引物、PCR產(chǎn)物酶法純化、從核酸混合物中去除含有3'羥基末端的單鏈DNA等。


圖1. Exonuclease I降解單鏈DNA示意圖

 

翌圣的Exonuclease I(Cat#14535ES)由分子酶改造平臺——ZymeEditor™重組表達而來,可高效消化單鏈DNA,嚴格質(zhì)控,無核酸外切酶(雙鏈)、核酸內(nèi)切酶、RNase殘留,80℃處理即可失活,適用于各種PCR反應(yīng)后引物的去除及從核酸混合物中去除含有3'羥基末端的單鏈DNA

 

數(shù)據(jù)展示
 
01
單鏈DNA消化能力與進口品牌一致
 
 

20 μL反應(yīng)體系中加入終濃度為15 pmol/μL的單鏈DNA底物,分別使用不同投入量(0.63、1.25、2.5、5、10、20 U)的翌圣及進口品牌N*的Exonuclease I在37℃下孵育15 min,80℃熱失活15 min,聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測單鏈DNA降解情況。結(jié)果顯示翌圣的Exonuclease I消化單鏈DNA的能力與進口品牌N*一致。

圖2. 翌圣及進口品牌N*對單鏈DNA的消化能力

 

02
無核酸內(nèi)切酶殘留
 
 

將500 ng底物DNA與100 U的Exonuclease I在37℃下孵育4 h,瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA條帶不發(fā)生變化,表明Exonuclease I無核酸內(nèi)切酶殘留。

 

圖3. 核酸內(nèi)切酶殘留檢測

 

03
無RNase殘留
 
 

將底物RNA與20 U的Exonuclease I在37℃下孵育4 h,瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA條帶不發(fā)生變化,表明Exonuclease I無RNase殘留。

圖4. RNase殘留檢測

 

 

產(chǎn)品推薦
 
 

定位

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號

PCR產(chǎn)物純化(核酸外切酶I+堿性磷酸酶)

 

 

Exonuclease I (20 U/μL)

14535ES

Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP)

10322ES

高保真PCR預(yù)混液

2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)

10164ES

瓊脂糖

Agarose

10208ES

核酸染料

YeaRed Nucleic Acid Gel Stain(10,000× in Water)

10202ES

DNA Marker

GoldBand系列marker

10501ES-10518ES

 



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