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精品推薦 | 僅需5min!高效完成反轉錄實驗

2023-8-2  閱讀(497)

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精品推薦 | 僅需5min!高效完成反轉錄實驗

Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit開發的快速逆轉錄試劑盒,適用于PCR擴增以及RT-qPCR實驗。與Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit相比,具有穩定的檢出率、特異性、產量保證,且反轉錄總時長最快可低于6分鐘,大大縮短了實驗時間。


 

 

產品名稱

Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit

 

 

產品特點

快速反轉:最快5分鐘左右即可完成第一鏈cDNA合成;

檢出率高:10 pg-1 ug的RNA檢出率;

高效合成:合成效率媲美進口,最長可合成14kb大小的片段;

應用廣泛:可用于下游PCR或qPCR,亦可調整引物保證small RNA等樣本的反轉錄;

示蹤便利:示蹤版包含無干擾、可視化藍色示蹤染料,提醒加樣進度;

穩定性好:試劑盒可4℃存放14天,反轉產物可37℃保存7天,反復凍融50次。

 

 

 

性能展示
01
快速反轉
 
 

 

圖. 以293T細胞總RNA為模板,使用11149ES進行逆轉錄,得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結果顯示,不同反轉錄時間處理的Ct值差值在0.2之內。說明產品可在5分鐘內完成反轉錄,反轉效果和長時間反轉效果持平。

 

02
靈敏度高,低可至10 pg
 
 

 

圖. 以293T細胞總RNA為模板,使用11149ES進行逆轉錄,得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結果顯示,RNA 投入量為10 pg-1 μg時,11149ES均可反轉成功,保證定量結果。

 

03
擴增性能好,最長擴增14 kb片段
 
 

 

圖. 以293T細胞總RNA為模板,使用11149ES進行反轉錄,將得到的cDNA進行PCR檢測。結果顯示,11149ES能夠滿足合成1 kb-14 kb長度的cDNA, 后續PCR有一定的試用場景。若需要直接反轉出10kb以上的片段,建議延長反轉錄時間至20-30分鐘,以保證最終片段的獲取。

 

04
示蹤便利
 
 

 

圖. 測試顯示,加入一定量的示蹤劑成分,未影響產品的反轉錄效率,Ct值、熔解曲線峰值和TM值未受到負面影響。

 

05
穩定性好
 
 

 

圖. 以293T細胞總RNA為模板,使用-20℃、4℃、25℃、37℃下分別儲存1、3、5、7天的11149ES進行逆轉錄,對得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結果顯示,不同溫度不同時間存放的試劑盒定量結果的△Ct均在0.3范圍內(△Ct于±0.5以內,認為兩者差異可忽略不計),具有良好的穩定性。

 

06
反轉錄效率比對
 
 

 

圖. 以293T細胞總RNA為模板,使用11149ES、進口A品牌進行逆轉錄,其中11149ES不進行gDNA去除步驟,將得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結果顯示,進口A品牌反轉時間為13分鐘, 11149ES反轉時間為5分鐘,不同產物定量顯示,11149ES的Ct更小或者接近進口競品,說明11149ES 5分鐘反轉效率優于或近似進口A品牌的反轉錄效率。

 

 

圖. 以293T細胞總RNA為模板,使用11149ES、進口B品牌進行逆轉錄,其中11149ES不進行gDNA去除步驟,得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結果顯示,進口B品牌反轉時間為20分鐘,11149ES反轉時間為5分鐘,不同量底物定量顯示,11149ES的Ct更小或者接近進口B品牌,說明11149ES 5分鐘反轉效率優于或近似進口B品牌的反轉錄效率。

 

 

 

客戶反饋體驗

 

樣本來源:菊花葉片

客戶評價:與某進口品牌效果相似,擴增常規大小的片段效果不錯。

 

樣本來源:果*葉片

客戶評價:藍色很好看

 

樣本來源:水稻

客戶評價:與其他反轉錄試劑盒相比,節省加樣時間,節省反轉錄反應時間(其他試劑盒需要15+2 min,本試劑盒只需5 min),后續基因克隆DNA電泳結果證明,本試劑盒反轉效率更高,條帶更亮,所以會更節省PCR使用試劑,節省成本。

 

 

 

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