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外泌體是什么？外泌體(Exosome)研究正確打開(kāi)方式
外泌體曾經(jīng)被認(rèn)為是細(xì)胞卸載廢物的一種方式，在過(guò)去的十年中，我們對(duì)外泌體的看法發(fā)生了巨大變化。我們已經(jīng)開(kāi)始認(rèn)識(shí)到，外泌體是從細(xì)胞中釋放出來(lái)的，通過(guò)其RNA，蛋白質(zhì)，脂質(zhì)和DNA的載體充當(dāng)信號(hào)載體和組織重塑者。參與癌癥，炎癥，免疫，中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能，心臟細(xì)胞功能。
外泌體在這些基本生物過(guò)程中的作用，它們作為生物標(biāo)志物，也可作為靶向遞送生物分子藥物載體（如治療）的工具研究。獲取和研究外泌體所需的一切，從分離和鑒定分析以及染色等。基于qPCR的外泌體miRNA分析還是RNA-Seq方法，我們都有高質(zhì)量的外泌體研究產(chǎn)品來(lái)支持您的科學(xué)研究并推進(jìn)您的工作。
外泌體是什么
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞內(nèi)多泡體與細(xì)胞膜合后，釋放到細(xì)胞外的一種直徑約30-150nm的膜性囊泡，區(qū)別于微囊泡（100-1000nm),凋亡小體（400-4000nm）。
目前學(xué)術(shù)界主流觀(guān)點(diǎn)認(rèn)為外泌體的產(chǎn)生過(guò)程為:組物膜內(nèi)陷形成內(nèi)體(endosome)。再形成多囊泡體(mutivesicutar bodesMVB)，最后分泌到細(xì)胞外成為外泌體。
性質(zhì)分類(lèi) | 外泌體Exosomes | 微囊泡 Microvesicles | 凋亡小體Apoptotic Bodies |
直徑 | 30-150nm | 100-1000nm | 400-4000nm |
密度(g/mL) | 1.10-1.18 | 1.02-1.22 | 1.16-1.28 |
蛋白標(biāo)記物 | Alix、TSG101、HSC70、 CD63、CD81、CD9 | Selectin、integrins、 CD40、MMP | Histones |
來(lái)源 | 細(xì)胞內(nèi)的多泡小體與細(xì)胞膜融合后，其內(nèi)的小泡釋放到細(xì)胞外 | 細(xì)胞膜出芽形成 | 凋亡時(shí)細(xì)胞膜皺縮內(nèi) 陷，分割包裹胞質(zhì)形 成的泡狀小體 |
攜帶遺傳信息 | mRNA、miRNA、DNA | mRNA、miRNA、DNA | mRNA、miRNA、DNA |
功能 | 胞內(nèi)信息傳遞，胞外物質(zhì)交換 | 胞內(nèi)信息傳遞，胞間遺傳物質(zhì)運(yùn)輸 | 調(diào)理病理學(xué)及生理發(fā)生過(guò)程 |
外泌體發(fā)現(xiàn)歷程
外泌體的功能
細(xì)胞增值與凋亡調(diào)控，轉(zhuǎn)移與侵襲，血管生成，免疫應(yīng)答，細(xì)胞分化，代謝調(diào)控，微生物組調(diào)控，病毒感染。
外泌體研究應(yīng)用
1、載體藥物研究：外泌體可作為載體將包裹在內(nèi)的藥物運(yùn)送到目標(biāo)區(qū)域，做到靶向治療；
2、診斷研究：主要研究外泌體的種類(lèi)、數(shù)目、大小和內(nèi)容物與疾病之間的關(guān)系；來(lái)預(yù)測(cè)疾 病的發(fā)生與進(jìn)展（如阿爾茨海默病）；
3、間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體改造：間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體與間充質(zhì)干細(xì)胞有著相似的功能， 間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體更穩(wěn)定，更好保存，易于管理和控制，可以人為改變其內(nèi)容物 的種類(lèi)和數(shù)量。
4、外泌體biomarker:外泌體內(nèi)容物分析轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、芯片（mRNA,LncRNA,miRNA,cir RNA)、蛋白質(zhì)組、代謝組分析。
外泌體提取方法
翌圣生物經(jīng)過(guò)研發(fā)，開(kāi)發(fā)出*的分離技術(shù)，可以快速?gòu)母鞣N樣本中如血漿/血清，細(xì)胞培養(yǎng)上清，尿液，乳液，腹水，羊水，唾液等其他體液中獲得大量完整的外泌體，適用于下游共培養(yǎng)，電鏡分析和高通量測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。
外泌體的科研思路
對(duì)外泌體進(jìn)行提取以后，通常對(duì)外泌體進(jìn)行鑒定，方法為：NTA粒徑分析、電鏡掃描和Western Blot，WB中的常見(jiàn)指標(biāo)有CD9, CD63, CD81、TSG101，后續(xù)科研思路比較廣泛，其中外泌體內(nèi)含RNA表達(dá)譜研究二代測(cè)序的研究是熱門(mén)的科學(xué)研究方向，下圖為常見(jiàn)的科研思路的整理圖：
外泌體的鑒定
外泌體形成和釋放后，會(huì)形成自身*的標(biāo)志性蛋白，利用Western blot對(duì)這些標(biāo)志蛋白進(jìn)行檢測(cè)，可以對(duì)外泌體進(jìn)行鑒定。翌圣外泌體鑒定試劑盒針對(duì)外泌體標(biāo)志蛋白CD63和TSG101開(kāi)發(fā)，適用于人、大鼠、小鼠外泌體的鑒定。
實(shí)驗(yàn)方法：
SDS-PAGE膠：10%分離膠；
樣品上樣量：10μg；
一抗：Anti-CD63抗體，1:2000稀釋?zhuān)籄nti-TSG101抗體，1:1000稀釋?zhuān)?℃孵育過(guò)夜；
二抗：Anti-mouse IgG，arigo ARG65350，1:10000稀釋?zhuān)覝胤跤?0min；
曝光時(shí)間：5s。
外泌體高通量測(cè)序
外泌體參與多種生理或病理過(guò)程，如抗原呈遞、RNA轉(zhuǎn)運(yùn)、組織修復(fù)、神經(jīng)退行性疾病、腫瘤轉(zhuǎn)移、代謝重建等。外泌體中含有細(xì)胞特異核酸和蛋白可以作為疾病的早期分子診斷標(biāo)志物，通過(guò)對(duì)外泌體內(nèi)RNA的測(cè)序分析進(jìn)行疾病鑒定和外泌體功能分析。翌圣生物建庫(kù)試劑盒，適合外泌體RNA高通量測(cè)序，低樣本高收獲。
優(yōu)質(zhì)的低樣本量RNA建庫(kù)質(zhì)量
圖1:不同DV200 Human FFPE RNA的500ng投入量建庫(kù)，Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina® 相比于競(jìng)品N* ，文庫(kù)大小一致，1st cDNA 合成效率更高。
圖2：Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina®相比于競(jìng)品N*，數(shù)據(jù)產(chǎn)出相關(guān)性高，數(shù)據(jù)均一性更好。
產(chǎn)品分類(lèi) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) |
外泌體提取試劑盒 | Hieff® Quick exosome isolation kit（for Cell Culture Media）細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒★ | 41201ES |
Hieff® Quick exosome isolation kit（for Serum/Plasma）血清/血漿外泌體快速抽提試劑盒★ | 41202ES | |
Hieff® Quick exosome isolation kit（for Body Fluids）體液外泌體快速抽提試劑盒★ | 41204ES | |
Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Cell Culture Media) 細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒Plus★ | 41205ES | |
Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Serum/Plasma) 血清/血漿外泌體快速抽提試劑盒Plus★ | 41206ES | |
Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Urine) 尿液外泌體快速抽提試劑盒Plus★ | 41207ES | |
Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Body Fluids) 體液外泌體快速抽提試劑盒Plus★ | 41208ES | |
Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Milk) 乳液外泌體快速抽提試劑盒Plus | 41209ES | |
外泌體鑒定試劑盒 | Hieff® Exosome identification kit for Westernblot外泌體鑒定試劑盒★ | 41203ES |
外泌體專(zhuān)用血清培養(yǎng)基 | Hieff® Serum-free medium (for exosome) 外泌體專(zhuān)用無(wú)血清培養(yǎng)基 | 41210ES |
外泌體示蹤 | DiI (DiIC18(3)) 細(xì)胞膜橙紅色熒光探針 | 40726ES |
DiO (DiOC18(3)) 細(xì)胞膜綠色熒光探針★ | 40725ES | |
DiR Iodide (DiIC18(7)) 細(xì)胞膜深紅色熒光探針★ | 40757ES | |
DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 細(xì)胞膜紅色熒光探針★ | 40758ES | |
DiIC16(3) perchlorate 細(xì)胞膜橙紅色熒光探針★ | 40772ES | |
Celltracker CM-DiI 活細(xì)胞示蹤劑CM-DiI （紅色）★ | 40718ES | |
外泌體抑制劑 | GW 4869 (hydrochloride hydrate)外泌體抑制劑 | 52321ES |
RNA建庫(kù)試劑盒 | Hieff NGS® Ultima Dual-Mode RNA Library Prep Kit for Illumina★ | 12252ES |
Hieff NGS® Ultima Dual-Mode RNA Library Prep Kit for MGI®★ | 13333ES |
