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N-2無血清添加劑（N-2 supplement,serum free）神經干細胞培養手冊
概述
神經干細胞(neural stem cell)是指存在于神經系統中，具有分化為神經神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞的潛能，從而能夠產生大量腦細胞組織，并能進行自我更新，并足以提供大量腦組織細胞的細胞群。
在神經干細胞培養中B-27與N-2添加劑的使用十分廣泛，N-2添加劑主要被用于神經母細胞瘤以及周圍神經系統（PNS）與中樞神經系統（CNS）來源的有絲分裂后期的神經元的生長和表達。
圖1. 神經干細胞的發展
神經系統疾病及治療機理
神經系統疾病是指發生于中樞神經系統或周圍神經系統的以感覺、意識、運動等障礙為主要表現的疾病。包括帕金森病、阿爾茨海默病、卒中性側索硬化癥（漸凍癥）、多發性硬化癥、亨廷頓病、脊髓損傷、外傷性腦損傷等。
神經干細胞的治療機理是：（i）患病部位組織損傷后釋放各種趨化因子，可以吸引神經干細胞聚集到損傷部位，并在局部微環境的作用下分化為不同種類的細胞，修復及補充損傷的神經細胞。由于缺血、缺氧導致的血管內皮細胞、膠質細胞的損傷，使局部通透性增加，另外在多種黏附分子的作用下，神經干細胞可以透過血腦屏障，高濃度的聚集在損傷部位；（ii）神經干細胞可以分泌多種神經營養因子，促進損傷細胞的修復；（iii）神經干細胞可以增強神經突觸之間的聯系，建立新的神經環路。
N-2添加劑的應用
1、膠質前體細胞分化為星形膠質細胞
星形膠質細胞是中樞神經系統的多功能膠質細胞，參與構成大腦的物理結構，具有支持神經細胞、維持神經元周圍離子濃度、免疫調節等重要作用。膠質前體細胞 (GPC)，也稱為膠質限制性祖細胞 (GRP) 或少突膠質祖細胞(OPC)，是具有分化為少突膠質細胞或星形膠質細胞潛力的細胞。GPC群體來源于組織或通過分化從多能細胞產生，這是由外源性應?因?誘導的。在這里，我們描述了?種可以調整以利于分化為星形膠質細胞或少突膠質細胞的培養系統。
實驗步驟
1）培養基配制
培養基組分 | 添加量（mL） |
DMEM基礎培養基，1X | 97 |
N-2無血清添加劑 | 1 |
胎牛血清 | 2 |
2）實驗流程
圖2. 膠質前體細胞分化為星形膠質細胞實驗流程圖
2、?質星形膠質細胞的培養
星形膠質細胞是中樞神經系統（CNS）中的膠質細胞類型，負責支持皮層回路活動所需的一系列功能，包括神經遞質再攝取、維持離子穩態以及參與突觸形成和消除。同時，神經元對星形膠質細胞參與層特異的分子發育調控具有支持補充作用。神經元-星形膠質細胞作為神經系統功能單位，它們之間的相互作用在中樞神經系統中非常重要，參與了中樞神經系統從胚胎發生到老化的各個活動，貫穿了神經元的整個發育過程。
實驗步驟
1）培養基的配制
培養基組分 | 添加量（mL） |
DMEM基礎培養基，1X | 88 |
N-2無血清添加劑 | 1 |
胎牛血清 | 10 |
青霉素-鏈霉素 | 1 |
可選擇添加：EGF（制備為100 μg/mL原液） | 0.02 |
【注】表皮生長因子(EGF)也可以添加，以增強星形膠質細胞增殖。
2）實驗流程
圖3. ?質星形膠質細胞的培養實驗流程圖
名詞小貼士：
神經（Nerve），是由聚集成束的神經纖維所構成。 而神經纖維本身是由多個神經元細胞構成，其神經元的構造為軸突外并被神經膠質細胞所形成的髓鞘包覆。 如此神經能將訊息從動物身體一處傳遞到另外一處，使動物能協調指揮動作與進行各種工作。
神經元（neuron），又名神經原或神經細胞，是神經系統的結構與功能單位之一。人腦中，神經細胞約有860億個。
神經干細胞（NSCs），是自我更新的多能細胞，可分化為神經系統的主要表型。這些細胞類型包括神經元，星形膠質細胞和少突膠質細胞。
神經祖細胞（NPC），是干細胞分裂的后代，其通常在體內經歷有限數量的復制循環。大腦中有許多“專業的"細胞，比如神經細胞，少突膠質細胞和星形膠質細胞。神經細胞傳遞和接受信息。少突膠質細胞包裹著神經細胞，為神經細胞更快地傳遞信息提供幫助。星形膠質細胞(星形細胞)通過提供營養和從身體的其他部位調節進入大腦來支持神經系統。
產品優勢
1、高效培養，質量優良；
2、質控嚴格，嚴格無菌、無內毒素；
3、批次穩定，批間差異小；
4、貨期迅速，現貨供應。
試劑訂購
培養基及添加劑
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
N-2 supplement,serum free,100X N-2無血清添加劑，100× | 60706ES | 5 mL |
B-27 supplement,serum free,50X B-27無血清添加劑,50X | 60703ES | 10 mL |
B-27 supplement without Vitamin A,serum free,50X B-27無血清添加劑,50X | 60704ES | 10 mL |
B-27 supplement, minus antioxidants, serum free,50X B-27 無血清添加劑，無抗氧化劑，50X | 60705ES | 10 mL |
HEPES Free Acid?細胞培養級 | 60110ES | 100 g/500 g |
L-alanyl-L-glutamine solution，200mM L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，200mM | 60701ES | 20 mL/100 mL/500 mL |
Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell Culture?細胞培養用青霉素-鏈霉素（雙抗） | 60162ES | 100 mL |
Ceturegel™ Matrix LDEV-Free基質膠 | 40183ES | 5 mL/10 mL |
小分子化合物（抑制劑/激活劑）
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
Y-27632 | 53006ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
MK-2206 2HCl | 53008ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
GDC-0068(Ipatasertib; RG7440; GDC0068) | 53009ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
Dorsomorphin?dihydrochloride? (Dorsomorphin 2HCl) | 53010ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
Y-27632 dihydrochloride | 52604ES | 5 mg/10 mg/25 mg |
細胞因子
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
Recombinant Human DKK-1 | 92275ES | 20 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human EGF | 92701ES | 100 μg/500 μg |
Recombinant Human bFGF | 91330ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human GDNF | 92102ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human Noggin | 92528ES | 5 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human BDNF | 92129ES | 5 μg/20 μg/100 μg |
