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體外細胞轉染試劑產品選擇指南
轉染的類型
細胞轉染試劑已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規試劑，轉染試劑在基因功能研究、基因表達調控、突變分析，以及基因治療、細胞治療、蛋白生產、疫苗生產等方面應用廣泛。
根據轉染后核酸是否整合到宿主細胞染色體中分成“瞬轉"（瞬時轉染）和“穩轉"（穩定轉染）。不同轉染方法的轉染效率、細胞毒性、對正常生理學的影響和基因表達水平各不相同，其原理、應用與特點比較如下表所示：
表1 不同轉染方法的比較
技術 | 原理 | 優點 | 缺點 |
化學轉染方法 | |||
陽離子脂質體 | 帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。 | 操作快速簡單 結果可重復 轉染效率高 可轉染DNA，RNA和蛋白質 適用于生產瞬時和穩定的蛋白質 可用于體內轉染 | 需進行條件優化(一些細胞系對陽離子脂質體較敏感) 有些細胞系不容易轉染 血清的存在干擾復合物的形成，導致低轉染效率 培養基中血清的缺失會增加細胞毒性 |
磷酸鈣共沉淀 | 磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞 | 便宜且容易獲得 適用于生產瞬時和穩定的蛋白質 轉染效率高（不限制細胞系） | 需要仔細制備試劑 – CaPO4溶液對pH，溫度和緩沖鹽濃度的變化敏感 可重復性較差 有細胞毒性，尤其對原代細胞 不能采用RPMI培養基，由于其含高濃度的磷酸鹽 不適用于動物體內轉染 |
葡聚糖 | 帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞。 | 操作簡單 結果可重復 便宜 | 對某些細胞有化學毒性 只限于瞬時轉染 轉染效率低，尤其在原代細胞中 |
其他陽離子聚合物 | 帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過內吞作用進入細胞。 | 在血清中穩定，對溫度不敏感 高轉染效率（限制細胞系） 結果可重復 | 對某些細胞有毒性 不能生物降解（樹枝狀大分子） 多用于瞬時轉染，較少用于穩定轉染 |
生物轉染方法 | |||
病毒轉染 | 本能感染細胞，傳遞遺傳物質 | 高轉染效率 適用于較難轉染的細胞系 可用于體內轉染 可用于構建穩定表達或瞬時表達的細胞系 | 被轉染的細胞系必須含毒受體 基因插入大小受限（病毒載體~10 kb，非病毒載體~100 kb） 技術難度高，且構建重組蛋白很費時 存在生物安全問題（激活潛在疾病，免疫原性反應，細胞毒性，插入突變，使細胞惡性轉化） |
物理轉染方法 | |||
電轉 | 高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入。 | 原理簡單 條件優化后可產生重復性的結果 不需要載體 不限制細胞類型和條件 條件優化后可以快速轉染大量細胞 | 需要特殊的設備 需要優化電轉脈沖和電壓參數 對細胞傷害很大 細胞死亡率很高因此需要大量細胞 會不可逆轉地損壞細胞膜，溶解細胞 |
生物傳遞粒子傳遞（粒子轟擊） | 將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在胞內逐步釋放表達。 | 不限制細胞類型和條件 可用于動物體內轉染 方法直接，結果可靠 不限制導入基因的大小和數量 | 需要昂貴的設備 會對樣品產生物理損傷 細胞死亡率很高因此需要大量細胞 需要準備微粒 轉染效率相對較低 對于研究應用成本較昂貴 |
顯微注射 | 用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核。 | 不限制細胞類型和條件 可以單細胞轉染 方法直接，結果可靠 不限制導入基因的大小和數量 不需要載體 | 需要昂貴的設備 有技術要求，且是勞動密集型（一次只能轉染一個細胞） 轉染細胞數有限 常引起細胞死亡 |
產品特點
針對DNA轉染試劑與RNA轉染試劑，翌圣生物擁有雄厚的研發與生產團隊，不斷優化配方，改良生產工藝，推出了多款以陽離子脂質體與陽離子聚合物為基礎的產品，為廣大科研院校與企業提供的產品，產品線覆蓋轉染試劑涉及的各個領域。
Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質體核酸轉染試劑 | 磷酸鈣法細胞轉染試劑 | Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺 | Hieff Trans™懸浮細胞專用脂質體核酸轉染試劑 |
40802ES | 40803ES | 40804ES | 40805ES |
Hieff Trans™ siRNA/miRNA體外轉染試劑 | Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 線性PEI轉染試劑MW25000 | Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000（rapid lysis） 線性PEI轉染試劑（速溶型）MW40000 | |
40806ES | 40815ES | 40816ES | |
高效性：適合瞬時轉染或者穩定轉染細胞系。
低毒性：轉染的細胞仍保持很好的活性。
適應性廣：普通細胞、難轉染的原代細胞全面覆蓋。
操作簡便：適合血清存在的培養基，轉染前后無需更換培養基。
性價比高：經濟實用，轉染效率高，價格低。
選擇指南
轉染試劑的選擇，需要根據實驗目的與實驗內容的不同進行選擇，如轉染的物質、具體的細胞、操作的便捷性等因素綜合考量。
產品 | Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質體核酸轉染試劑 | 磷酸鈣法細胞轉染試劑 | Hieff Trans™懸浮細胞專用脂質體核酸轉染試劑 | Hieff Trans™ siRNA/miRNA體外轉染試劑 | Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 線性PEI轉染試劑MW25000 | Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000（rapid lysis） 線性PEI轉染試劑（速溶型）MW40000 |
細胞類型 | 常規 | 常規 | 常規 | 常規 | 常規 | 常規 |
難轉染 | 難轉染 | 難轉染 | ||||
核酸類型 | DNA | DNA | DNA | DNA | DNA | |
siRNA | siRNA | siRNA | ||||
miRNA | ||||||
mimic miRNA | ||||||
antimiRNA | ||||||
DNA/siRNA共轉染 | DNA/siRNA共轉染 | |||||
多質粒病毒包裝 | 多質粒病毒包裝 | 多質粒病毒包裝 | 多質粒病毒包裝 |
應用案例
Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質體核酸轉染試劑
Hieff TransTM以無菌的液體形式提供。通常情況下對于24孔板轉染，每次用1.5 μL左右，則1 mL Hieff TransTM約可做660次轉染；對于6孔板，每次用6 μL左右，則1 mL Hieff TransTM約可做160次轉染；
更多詳情請參見Hieff Trans™脂質體轉染試劑，讓您對轉染自信滿滿
Polyethylenimine Linear (PEI) MW40000（rapid lysis） 線性PEI轉染試劑（速溶型）MW40000
PEI 40000是一種分子量為40000的高電荷陽離子聚合物，非常容易結合帶負電荷的核酸分子，形成復合物，并使該復合物進入細胞中。PEI 40000是一種瞬時轉染試劑，細胞毒性低，轉染效率高，在HEK293和CHO等細胞中基因表達效率較高。目前已經驗證線性PEI轉染試劑廣泛適用于多種細胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 、Sf9、HepG2和Hela細胞等。轉染效率高達80%~90%。
更多詳情請參見轉染新寵——PEI MAX （線性PEI MW 40000）更高效的轉染試劑
Hieff Trans™ siRNA/miRNA體外轉染試劑
該產品可在廣泛的細胞系中，實現1 nM的siRNA超過90%的表達效率，避免了脫靶效應。適用于多種細胞轉染，包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等貼壁細胞；以及難以轉染的懸浮細胞系，如K562或THP-1細胞，可達到80%的沉默效率；同時還包括一些原代細胞，原代人成纖維細胞和原代人肝細胞等，可達到80%的沉默效率。
轉染條件參考
除各產品的說明書外，客戶根據各自具體的實驗內容進行操作，在使用量上會有不同的差異，根據客戶使用產品后反饋的體外細胞轉染條件，進行了整理，供大家參考。
產品名稱/貨號 | Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質體核酸轉染試劑/40802ES | ||||
細胞 | 培養容器 | 鋪板密度 | DNA量 | Hieff trans量 | 轉染效率 |
A549 | 6 well | 90% | 0.7 μg | 1.15 μL | +++ |
BV 2 | 24 well | 95% | 0.2 μg | 0.2 μL | ++ |
C2C12 | 24 well | 80% - 90% | 1 μg | 5 μL | ++ |
DF 1 | 24 well | 80% - 90% | 0.5 μg | 0.5 μL | +++ |
H520 | 6 well | 80% | 1.2μg | 6 μL | ++ |
HaCaT | 96 well | 70% | 100 ng | 1 μL | ++ |
HCT116 | 6 well | 90% | 4 μg | 10 μL | ++ |
HEK 293 | 6 well | 95% | 2 μg | 10 μL | 80 - 90% |
HEK 293FT | 24 well | 85% | 1 μg | 4 μL | 90% |
HEK 293T | 12 well | 1×105 | 1 μg | 2 μL | +++ |
HEK 293T（懸?。?/span> | 30 ml | 80% | 30 μg | 60 μL | ++ |
Hela | 12 well | 90% | 0.2μg | 0.6 μL | 90% |
Hela | 12 well | 80% | 1 μg | 3 μL | +++ |
HepG2 | 12 well | 80% | 1 μg | 3 μL | ++ |
HUVEC | 24 well | 80% | 1 μg | 2 μL | ++ |
MCF10A | 10 cm dish | 60% | 5 μg | 15 μL | ++ |
N2A | 24 well | 70% - 80% | 300 ng | 900 μL | + |
NCI H1975 | 6 well | 80% | 4 μg | 10 μL | +++ |
NIH 3T3 | 6 well | 90% | 4 μg | 10 μL | +++ |
Raw 264.7 | 35 mm dish | 80% | 1 μg | 2 μL | 90% |
Vero | 6 well | 80% | 3 μg | 9 μL | +++ |
細胞 | 培養容器 | 鋪板密度 | siRNA量 | Hieff trans量 | 轉染效率 |
HK2 | 6 well | 65% | 100 pmol | 6 μL | +++ |
常見問題
一 Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂質體核酸轉染試劑
Q: 配制核酸轉染試劑復合物時能否有血清的存在？
A: 血清的存在會影響脂質體的形成，建議配制核酸轉染試劑復合物時采用無血清培養基（一般推薦MEM 培養基）。
Q: 使用Hieff Trans™脂質體核酸轉染試劑需要注意什么？
A:
1）細胞轉染時，細胞密度以80%-95%為佳，具體鋪板密度根據細胞情況酌情而定；
2）使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉染效率；
3）制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑；
4）轉染的時候培養基中不能添加抗生素；
5）試劑應該在2-8℃度保存，要注意避免多次反復長時間開蓋；
6）初次使用應優化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到最大的轉染效率。DNA 和轉染試劑的比例，通常推薦是1:2-1:3。
Q：轉染后需要進行終止嗎？
A：不需要。脂質體復合物可以穩定存在6個小時。如果在進行轉染前沒有進行細胞換液，為了保證細胞正常生長所需的營養，需要在4～6小時后換用新的培養基。但如果轉染之前已進行過換液，則在脂質體轉染后不需要進行再次換液。
Q：可否進行DNA和siRNA的共轉染？效果如何？
A：可以，DNA和siRNA的共轉染時候，siRNA轉染效率會略微差點。
Q：轉染試劑可否進行慢病毒包裝的轉染呢？
A：慢病毒包裝是可以的。
Q：懸浮細胞轉染是否可以用Hieff Trans™脂質體核酸轉染試劑？
A：Hieff Trans™脂質體核酸轉染試劑可以用于懸浮細胞轉染，具體操作可見Protocol。另外，我們還推出了專門用于懸浮細胞的轉染試劑（Cat No. 40805, 懸浮細胞專用脂質體核酸轉染試劑）。
二 Hieff Trans™ siRNA/miRNA體外轉染試劑
Q: 轉染試劑轉染后需要換液嗎？
A: 對于該問題可以分為兩種情況：1、轉染之前如果沒有換液應在轉染6小時左右后換液，以保證細胞生長所需營養；2、如果轉染之前如果有換液，可以按照培養細胞正常操作待？？后進行換液操作。
Q：轉染試劑可以凍存嗎？
A：不可凍存，因為轉染試劑是一種PEI陽離子轉染試劑，低溫下凍存，會破壞PEI轉染試劑的活性，因此是2-8℃度儲存，保持轉染效能。
產品訂購
名稱 | 貨號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質體核酸轉染試劑 | 40802ES01 | 100 μL | 168.00 |
40802ES02 | 0.5 mL | 738.00 | |
40802ES03 | 1.0 mL | 1308.00 | |
40802ES08 | 5×1mL | 4878.00 | |
Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸鈣法細胞轉染試劑 | 40803ES70 | 200 T | 625.00 |
Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml） | 40804ES76 | 500 μL | 180.00 |
40804ES86 | 5×500 μL | 500.00 | |
Hieff TransTM Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent 懸浮細胞專用脂質體核酸轉染試劑 | 40805ES01 | 100 μL | 228.00 |
40805ES02 | 0.5 mL | 948.00 | |
40805ES03 | 1.0 mL | 1678.00 | |
40805ES08 | 5×1 mL | 5268.00 | |
Hieff TransTM in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent siRNA/miRNA體外轉染試劑 | 40806ES01 | 0.1 mL | 372.00 |
40806ES02 | 0.5 mL | 1472.00 | |
40806ES03 | 1.0 mL | 2572.00 | |
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 線性PEI轉染試劑MW25000 | 40815ES03 | 1 g | 1855.00 |
40815ES08 | 5×1 g | 7255.00 | |
Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000（rapid lysis）線性PEI轉染試劑（速溶型）MW40000 | 40816ES02 | 100 mg | 655.00 |
40816ES03 | 1 g | 1855.00 | |
40816ES08 | 5×1 g | 7255.00 |
使用產品已發表的部分文獻
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